Almendro

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UNIVERSIDAD MAYOR
FACULTAD DE CIENCIAS
SILVOAGROPECUARIAS
AGRONOMIA


LABORATORIO N°3



“Caracterización cinética de la enzima fosfatasa ácida de extracto crudo de papa”









Integrantes: Leda AcevedoFrancisco González
Raimundo Pozo

Profesores: Hans Krautwurst
Jorge Martínez

Sección: 04Introducción



Cinética enzimática:

Km es la constante de Michaelis-Menten donde la concentración de sustrato [s] alcanza la mitad de Vmax.

Vmax es cuando la Velocidad inicial (V0) es independiente de la concentración de sustrato [s], por más que se agregue sustrato la velocidad no aumenta.


• Ecuación de Michailes-Menten

V0= Vmax [s]
Km + [s]



• GráficoMichaelis-Menten


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• Ecuación Dobles recíprocos

1 = Km + 1
V0 Vmax [s] Vmax




• Gráfico Dobles recíprocos

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• Efecto de la temperatura sobre actividad enzimática:

Al aumentar la temperatura aumenta la energía cinética de las moléculas reaccionantes y es mayor la probabilidad de que ocurran colisiones efectivas para que la reacción se cumpla,como las reacciones enzimáticas no son un excepción a esta regla, su velocidad aumenta con la temperatura. Pero una vez que la temperatura llega a cierto valor, esta empieza a desnaturalizarse y la velocidad de la reacción comienza a disminuir.



• Efecto de la concentración de sustrato sobre la actividad enzimática:


La concertación del sustrato es uno de los factores que se aplicansobre la enzima para determinar su actividad. Este modelo solo es válido cuando la concentración de sustrato es mayor que la concentración de la enzima, y para condiciones que la concentración del complejo enzima-sustrato es constante.



































Objetivos

Objetivos Generales:
Conocer las propiedades de las enzimas, a través del estudiocinético de éstas, utilizando método de espectrofotometría.



Objetivos Específicos
Laboratorio 2: Determinar la temperatura óptima de trabajo de la Fosfatasa ácida.
Laboratorio 2: Estudiar el efecto del sustrato sobre la actividad enzimática de la Fosfatasa.




Procedimientos

Se siguió el procedimiento especificado en la guía n°2: “CARACTERIZACION CINETICA DE LA ENZIMA FOSFATASAACIDA DEL EXTRACTO CRUDO DE LA PAPA”. excepto en

Experimento 3.3.- “Efecto de la temperatura en la reacción enzimática”,
• El valor de los compuestos p-nitrofenilfosfato 12,5ml es cambiado a 25,5ml.
• Buffer citrato PH 4,8 es cambiado a PH 5,2.


Experimento 3.4.- “Efecto de la concentración de sustrato en la reacción enzimática”,
• El valor de los compuestosp-nitrofenilfosfato 12,5ml es cambiado a 25,5ml.
• Buffer citrato PH 4,8 es cambiado a PH 5,2.
• El tiempo de incubación de 37°c de 30 min es cambiado a 10min.
• Durante de la incubación, la preparación de 9 tubos que contengan 5ml de NaOH 0,1M es cambiada a 10 tubos con el mismo contenido.




















Presentación de resultados


Los 6 tubos que se prepararon enel experimento n° 1 con p-nitrofenol, fueron sometidos a la siguiente igualdad para determinar su concentración final:

Ci · Vi = Cf · Vf (1)


donde:
C = concentración de la solución [[pic]/[pic]]
V = volumen de la solución [[pic]]


*Todas estas concentraciones extraídas de la solución estándar 60...