Aminoacidos y proteinas

AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS
Arboleda Santiago
Motta Diana M.
Posada Daniel
Octubre 13 de 2010 Santiago de Cali Universidad del Valle
PALABRAS CLAVE: Aminoácido, Electroforesis, Proteínas, Cromatografía, Reacción de Biuret, Reacción Xantoproteica.
RESUMEN

INTRODUCCION

METODOLOGIA
Se siguió la metodología descrita en la guía de laboratorio de bioquímica I para la práctica deAminoácidos y proteínas, no se hicieron cambios de esta metodología.
RESULTADOS
1. Proceso de separación de aminoácidos por medio de la cromatografía de papel.
Se realizó la cromatografía de papel con tres aminoácidos, la alanina, el acido aspártico, la leucina y una mezcla de estos; después de la cromatografía se realizó el cálculo del Rf para cada uno de estos aminoácidos (Tabla 1)
Tabla 1: Rfcalculado a partir del cromatograma, calculado trazando el perímetro y centro de cada una de las manchas de los aminoácidos y dividido esto sobre el recorrido del solvente en el papel.
Aminoácido | Rf |
Alanina | 0.56 |
Leucina | 0.75 |
Ácido Aspártico | 0.24 |

Determinación de Rf mediante cromatografía

Figura 1: Cromatograma de alanina, ácido aspártico, leucina y la mezcla de estostres, mostrando la diferencia en la migración, los centros de las marcas y hasta donde llego la marca del solvente.

2. Separación de aminoácidos por medio de la electroforesis.
En esta prueba se observaron las migraciones de los aminoácidos de acuerdo a las cargas parciales que presentaban estos en el aparato de electroforesis (Figura 3); Se observa que los aminoácidos migran de acuerdo a sucarga, siendo su migración hacia el cátodo si su carga parcial es positiva y hacia el ánodo si su carga parcial es negativa, el lisina y el alanina tienen carga positiva mientras que el ácido aspártico tiene carga negativa (Figura 2).
Posición de los aminoácidos en la prueba de electroforesis.

Figura 2: Papel Whatman #1 después de la prueba de electroforesis para una mezcla de alanina, lisina yácido aspártico durante 1 hora, pH 4,5 un voltaje de 100 voltios y revelado con reactivo de nihidrina. Las posiciones de los aminoácidos son de izquierda a derecha ácido aspártico, alanina y lisina.
Aparato de electroforesis

Figura 3: Aparato de electroforesis utilizado a 100 voltios, un pH de 4,5 y 1 hora de tiempo de la prueba
3. Reacción de los aminoácidos con la nihidrina.
En estaprueba se puede observar que el aminoácido prolina resulta negativo (Figura 4) para la prueba de nihidrina y los aminoácidos arginina y glicina presentan un resultado positivo(Tabla 2).
Reacción de los aminoácidos con nihidrina.

Figura 4: Reacción de los aminoácidos de izquierda a derecha Arginina, Glicina y Prolina con nihidrina y calentamiento, se puede observar la coloración de la prolinaque es un resultado negativo de la prueba de la nihidrina.
Tabla 2: Descripción de la coloración presentada al agregar reactivo de nihidrina y calentamiento durante cinco minutos a cada uno de los reactivos arginina, glicina y prolina
Aminoácidos | Coloración después de calentar |
Arginina | Azul oscuro |
Glicina | Azul oscuro |
Prolina | Color amarillo translucido |

4. Coagulaciónde una proteína.
Los resultados de la aplicación de calor, adición de cetona y acido clorhídrico para la coagulación de la proteína albumina de huevo todos dieron positivos, la adición de sal dio resultados negativos para coagulación (figura 5); la temperatura a la que se coagulo la proteína 55 °C (Tabla 3) es mucho más alta que la temperatura ambiente 24°C en Cali, Colombia, aunque menor que latemperatura de ebullición del agua a una atmosfera de presión 100°C.
Tabla 3: Descripción cualitativa de los resultados observados en la reacción de la albumina con la temperatura, la acetona, el ácido clorhídrico y la sal para comprobar coagulación de la proteína.
Reactivo agregado a la solución de albumina al 2 %. | Resultado |
Sola (blanco) | Permanece igual translucida y fluida |...