aminoacidos

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
LABORATORIO DE BIOQUIMICA II

DOCUMENTO DE APOYO
PRÁCTICA 3


IDENTIFICACIÓN DE GLUCÓGENO EN EL HÍGADO ANIMAL
Álvarez, L; Barrillas, H; Barrios, L; Beato, J; Chajón, D; Chicas, E; Diéguez, J; Hernández, W;Ordoñez, K; Pacheco, E; Paniagua, J; Sánchez, J;

GENERALIDADES DEL GLUCÓGENO

El glucógeno es la forma de almacenamiento de la glucosa en los tejidos animales. Se encuentra principalmente en el hígado y en el músculo representando hasta un 10% y un 1-2% de su peso húmedo, respectivamente.
El glucógeno se almacena en el hígado y en el músculo esquelético. Pueden encontrarse pequeñas cantidades deglucógeno en ciertas células gliales del cerebro. Una sola molécula de glucógeno puede contener más de 120.000 moléculas de glucosa.
La importancia de que el glucógeno sea una molécula tan ramificada es debido a que:
1. La ramificación aumenta su solubilidad.
2. La ramificación permite la abundancia de residuos de glucosa, que al estar unidos entre si no poseen extremos reductores libres, quevan a ser los lugares de unión de las enzimas glucógeno fosforilasa y glucógeno sintetasa, es decir, las ramificaciones facilitan tanto la velocidad de síntesis como la de degradación del glucógeno.
Se encuentra más ramificado que el almidón, las ramificaciones ocurren cada 8 a 10 residuos de glucosa con enlaces α (1-6). Las enzimas α- y β-amilasas hidrolizan estos enlaces y también se producedextrinas limite, que van a ser posteriormente hidrolizadas por una enzima desramificadora, la α (1-6) glucosidasa.
HIDRÓLISIS DE GLUCÓGENO Y PRUEBA DE FEHLING

El glucógeno se libera de los tejidos que lo contienen por calentamiento con una base fuerte (KOH) hasta la destrucción total del tejido. La separación del glucógeno del tejido se consigue mediante la adición de etanol (precipitapolisacáridos y elimina los monosacáridos solubles)
El glucógeno posee una estructura ramificada con cadenas lineales de restos consecutivos de glucosa, unidos por enlaces α (1-4), y por enlaces α (1-6) en los puntos de ramificación La hidrólisis de estos enlaces glucosídicos puede ser catalizada por algún ácido mineral, el cual actúa rompiendo enlaces al azar, con formación intermediaria detodos los posibles oligosacáridos y la conversión final de éstos en glucosa (1).
La reacción cuantitativa de determinación de los azucares reductores, denominada en general “determinación del índice de cobre”, se basa en la oxidación del hidrato de cobre correspondiente con el licor de fehling, y la determinación final de cobre formado por la reducción del complejo que forma el ion cobre (2).
Elreactivo de Fehling, también conocido como Licor de Fehling, es una disolución descubierta por el químico alemán Hermann von Fehling, se utiliza como reactivo para la determinación de azúcares reductores. Se basa en el carácter reductor de los monosacáridos y de la mayoría de los disacáridos (excepto la sacarosa).
El ensayo con el licor de Fehling se fundamenta en el poder reductor del grupocarbonilo de un aldehído. Éste se oxida a ácido y reduce la sal de cobre (II) en medio alcalino a óxido de cobre (I), que forma un precipitado de color rojo. Un aspecto importante de esta reacción es que la forma aldehído puede detectarse fácilmente aunque exista en muy pequeña cantidad. Si un azúcar reduce el licor de Fehling a óxido de cobre (I) rojo, se dice que es un azúcar reductor (3).
Al aplicaresta prueba en el caso de hidrólisis de glucógeno, la reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo-ladrillo. La reacción positiva indica que se ha conseguido romper el enlace O-glucosídico del glucógeno y por ende se encuentran en la solución péptidos de diferentes longitudes capaces de participar en las reacciones de oxidorreducción. La reacción será negativa si la muestra...