Amor

HIBRIDACION DE ACIDOS NUCLEICOS EN FILTROS.
Introducción.
Reacción de hibridación de ácidos nucleicos.
Estringencia.
Muestras.
Sondas.
Técnicas de hibridación de ácidos nucleicos.
Métodos de transferencia: Southem y Northem
Otras técnicas de hibridación.
Sensibilidad de detección
Aplicaciones al diagnostico.

1. Introducción.
La hibridación de ácidos nucleicos se fundamenta en laformación de una doble cadena a partir dos secuencias nucleotidicas de simple cadena complementaria. Una de las secuencias de simple cadena es la de la muestra que se quiere identificar, y la otra cadena está marcada para facilitar la revelación del resultado de la reacción de complementación por pareo de bases. Esta complementación, así como su estabilidad, se emplean para analizar secuenciasnucleotidicas relacionadas, y también se aplican en un amplio rango de otros problemas biológicos.
La información genética para una función biológica determinada está contenida en el genoma, y cualquier fragmento de nucleótidico particular de este puede ser sometido a hibridación e identificado en ausencia de productos del gen, independientemente de la actividad metabólica que él represente. Eldesarrollo de tecnología de ADN recombinante, así como de síntesis química de ácidos nucleicos han permitidos producir sondas con la especificidad deseada, para la hibridación en solución, sobre filtro o in situ.

2. Reacción de hibridación de ácidos nucleicos.
La reacción de hibridación de ácidos nucleicos depende de la colisión, al azar, de dos secuencias de simple cadena complementarias, enpresencia de condiciones de fuerza iónica y temperatura que permiten la formación de moléculas de doble cadena.
El tiempo de la reacción en solución está determinado por la concentracion de las especies reactantes y por una constante de velocidad de segundo orden. El tiempo de reacción requerido es proporcional a la longitud de las distintas secuencias del ácido nucleico que participan en la reacción.La reasociacion de las secuencias de ADN puede ser monitoreada por varios métodos como son las unión a hidroxiapatia, la resistencia a la digestión con nucleasa S1 y la hipercromicidad atípica. Comúnmente se usan la autoradiografia, el conteo por centelleo, así como procederes colimetricos y fluorimetricos para detectar los híbridos en una reacción de hibridación.

3. Estringencia.
LaEstringencia de las condiciones de una reacción de hibridación determina la especificidad de está. Cuando una reacción de hibridación las condiciones escogidas solo permiten la formación de híbridos con un grado elevado de complementaridad, se dice que son estringentes, mientras que cuando las condiciones de reacción permiten la formación de híbridos a pesar de que falta de pareo de bases elevadas, sedice que son permisivas relajadas o de bajs Estringencia.
Se ha encontrado que una reacción de hibridación estringente, seguida de un lavado estringente, es lo indicado para detectar miembros relacionados de una familia de secuencias de ácidos nucleicos. Así, como un proceder estringente solo se formaran los híbridos más estables mientras que un proceder relajado se formaran los híbridos con menorestabilidad.
Es posible detectar la sustitución de una sola base en una molécula de ácido nucleico empleando sondas de oligonucleótidos de 15 a 20 bases, a causa de que existe una marcada diferencia en estabilidad entre aquellos híbridos con homología total y los que muestran homología incompleta.

4. Muestras.
Para que sea útil al diagnóstico, el ácido nucleico de la muestra debe ser extraídode la células, microbios y del medio intersticial y finalmente convertido a la forma de simple cadena por desnaturalización a una temperatura a una temperatura por encima de su temperatura de fusión. Cuando más purificado sean el ADN y el ARN de la muestra, mejores serán los resultados de la hibridación.

5. Sondas.
Cualquier tipo de ácido nucleico, clonado o no, y el obtenido por síntesis...