Amplificacion Del Adn


INSTITUTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

BIOLOGIA MOLECULAR

Dra: ALMA GABRIELA VERDUGO

PRACTICA
“VISUALIZACION DE FRAGMENTOS DE ADN POR AMPLIFICACION”

PRESENTA
AVALOS GONZÁLEZ ABNER
HERNÁNDEZ CORONEL GABRIELA
HERNANDEZ DE LA CRUZ ALBERTO
PANIAGUA CAMACHO ULISES





TUXTLA GUTIÉRREZ, CHIAPAS 01 DE OCTUBRE DE 2014

INTRODUCCIÓN
Laintroducción de métodos sin la utilización de células para multiplicar fragmentos de DNA de origen definido a partir de una mezcla compleja, facilito en gran medida al análisis molecular de genes. El método llamado reacción en cadena de la polimerasa (PCR) que cumple con estas características fue desarrollado en 1985. La PCR es un método aplicado para multiplicar fragmentos de DNA, que puede llevarse a caboutilizando una maquina automatizada (denominada termocicladora). La PCR estándar es un procedimiento in vitro que permite amplificar secuencias de ADN definidas a partir de pequeñas cantidades de ADN de diferentes orígenes (Passarge, 2009).
La amplificación por PCR se utiliza, desde el punto de vista clínico para el diagnostico rápido de enfermedades infecciosas y la detección de cuadrospatologicosraros. Para la detección de los productos de la PCR. El producto específico de la amplificación por PCR que contienen el ácido nucleico diana de interés se denomina amplicon. La detección por medio de sondas de los amplicones cumple dos propósitos: permite la visualización del producto de la PCR y proporciona especificidad al asegurar que el amplicon es la secuencia diana en estudio y no elresultado de una amplificación inespecífica (Forbes, 2009).
La electroforesis en gel es una de las formas más simples de adquirir información acerca del amplicon. Donde se pueden usar diferentes tipos de geles para la electroforesis en gel, pero a menudo se usa un gel simple de agarosa. Este gel es rectangular y tiene huecos y pocillos cerca de un extremo. Se coloca dentro de una caja de gel y secubre con buffer. Para realizar la electroforesis en gel, los productos de amplificación se mezclan con una carga de colorante, que es un líquido teñido, viscoso y denso.
Después de la carga, se pasa una corriente continua a través del contenido de la caja del gel y el ADN cargado negativamente migra hacia el nodo. Los trozos más grandes de DNA se retrasan por la matriz de gel comparados con laporciones más pequeñas de DNA (Koneman, 2008)

OBJETIVO
Comprobar la eficacia del método de extracción de ADN utilizado previamente a través de las características migratorias de la molécula en un gel de agarosa y poder explicar su comportamiento.

METODO

Se descongelo el master mix cebador, el ADN de la escena del crimen y el ADN del sospechoso.Marcamos los tubos y centrifugamos, se prosiguió ha
Agitar bien para la solución del fondo de los tubos.
Agregamos 200ml de CSIP al mismo tubo.
Colocamos 1000 micras de mescla mix en el tubo con MMP.
Agregar 120 ml de master mix en los tubos (8) amarillos restantes.
Colocar cada tubo en el flotador de espuma.
Agregar 2ml de DNA de la escena del crimen en los 8 tubos marcados con “es”.
Agregar 26mlde DNA de la escena del sospechoso en los tubos marcados con “C”.
Agregar 25ml de DNA sospechosos en los tubos marcados con “B”.
Agregar 25ml de DNA sospechoso en los tubos marcados con “A”.



RESULTADOS
Los resultados obtenidos al final de la práctica, pudimos visualizar y fotografiar el gel, se pudo observar de la siguiente manera, en la imagen 1. Observamos que el ADN se desplazó del polonegativo al polo positivo, además se observan bandas borrosas extendidas de la primera línea (pocillos 1, 4, 6) creemos que se debió a la contaminación del ADN.
Se observan escasas diferencias en la intensidad de las bandas, esto en relación con la concentración de ADN. El gel que utilizamos fue necesario teñirlo con bromuro de etidío tras la electroforesis debido a que sin él, las bandas no se...