Análisis citogenético de linfocitos

Análisis citogenético de linfocitos
Mayra Janeth Tejeda González
6-diciembre-2011
INTRODUCCIÓN
La citogenética es la parte de la genética que estudia los cromosomas mediante el cultivo de tejidos. Y gracias a ésta se han podido identificar gran cantidad de enfermedades raras (Canudas, 2008),  causadas por un número o una estructura anómalos de los cromosomas (Navarro, sf.) que no se sabíaque existían y que no se habían catalogado (Canudas, 2008).
 Los cromosomas son estructuras complejas ubicadas en el núcleo de las células, compuestos por DNA, histonas y otras proteínas, RNA y polisacáridos (Herráez, 2008).
Los linfocitos no se dividen en la sangre periférica (Ordaz y Castañeda, 2005), más sin embargo pueden entrar en mitosis en condiciones in vitro. Con este descubrimiento, sepudo realizar el cariotipo a partir de sangre periférica, el cual muestra varias ventajas, ya que es fácil de obtener y permite la obtención de un gran número de células con lo que se pueden observar mayor numero de células en metafase (Navarro, sf.), se logra que las células entren en mitosis adicionando al medio donde se encuentren un agente mitogénico, siendo el más utilizado lafitohemaglutinina. Este agente induce la transformación de linfoblatos a linfocitos, las células deben mantenerse con la fitohemaglutinina durante 72 h a 37° C. Posteriormente se requiere detenerlas en metafase, esto se logra con el empleo de la colchicina, que es un alcaloide que impide la formación del huso acromático, para que las muestras tengan una adecuada dispersión de los cromosomas se utilizansoluciones hipotónicas, como el KCl 75 nM y se fijan con metanol-ácido acético en proporción 3:1 y por ultimo se tiñen con Giemsa (Ordaz y Castañeda, 2005).
El cromosoma metafásico está condensado lo que permite trabajar con comodidad ya que se pueden observar claramente (Canudas, 2008).
A partir de 1970 se comenzaron a realizar una serie de tratamientos y tinciones a los cromosomas para identificarlosmejor, existen dos técnicas de bandeo:
* Bandas de todo el cromosoma
* Bandas que tiñen solo determinados puntos del cromosoma
La técnica de bandeo de todo el cromosomas se utiliza para la realización del cariotipo. Esta nos permite observar los cromosomas con bandas alternantes oscuras y claras, además de una configuración característica y estable de cada cromosoma. Existen diferentesbandas para esta técnica como: Bandas Q, G y R. Siendo las más sobresalientes las bandas G (Calasanz, sf.). Se obtienen tratando los cromosomas con una solución proteolítica de tripsina, y posteriormente tiñiendo con Giemsa (Herráez, 2008), permite detectar en un único experimento, tanto las alteraciones numéricas como monosomías, trisomías, etc., así como las estructurales como translocaciones,inversiones, deleciones, etc. presentes en todo el genoma (Calasanz, sf.).
El ácido carmínico es un colorante orgánico que tiñe el material genético, resulta ser de gran eficacia en la tinción de cromosomas (Portillo).

OBJETIVO
Obtención de células en división mitótica en la etapa de metafase a partir de sangre periférica para estudios citogenéticas.

METODOLOGÍA
Se prepararon dos solucionespara la realización de la práctica la primera fue KCl, se pesaron 0.015 g de KCl en la balanza analítica, fueron colocado en un matraz aforado de 200 mL el cual de aforo con agua desionizada.
La otra solución fue de metanol-ácido acético la cual de preparo en proporción 3:1, fueron colocados 25 mL de ácido acético y 75 mL de metanol quedando un total de 100 mL.
Se colocó 1 mL de sangre en unvial el cual contenía 1 mL de suero bovino y 200 µL de fitohemaglutinina, se llevó al congelador donde se mantuvo a 4° C hasta ser utilizada. 72 h antes de ser utilizada se coloco en una incubadora la cual mantenía una temperatura de 37° C, una vez transcurrido el tiempo se saco la muestra y en campana de flujo laminar le fueron colocados 35 µL de colchicina al 2%, y se volvió a llevar a la...