Análisis del desarrollo de la línea germinal en el embrión de polluelo usando un anticuerpo

Análisis del desarrollo de la línea germinal en el embrión de polluelo usando un anticuerpo

Sumario

Encontramos que el EMA-1, un anticuerpo monoclonal originalmente desarrollado contra el carninoma de células embrionales murinas (Nulli SCC1), también etiqueta células germinales primordiales del polluelo (PGCs). Usamos este anticuerpo en estudios inmunohistológicos para seguir eldesarrollo de los PGCs en el embrión de polluelo desde la etapa de aparición inicial bajo el epiblasto, a través de su fase migratoria y subsecuente colonización del epitelio germinal. Durante la formación del hipoblasto, células individuales de EMA-1 aparecen separadas de la superficie basal del epiblasto y entran al blastocele, coincidente con la aparición de PGCs morfológicamente identificables en estamisma área. EMA-1 continúa etiquetando células germinales hasta la iniciación de la gametogénesis en cada sexo; específicamente, el etiquetamiento estuvo ausente durante 7-8 días de incubación en hembras y empezó a decrecer a los 11 días de incubación en machos. Hubo recurrencia de epítopo en la ovogonia a los 15 días de incubación, pero no en la espermatogonia durante el resto del desarrollo através de la eclosión. Estas observaciones son consistentes con un origen de epiblasto para la línea germinal aviar, y son sorprendentemente similares a aquellas reportadas por el embrión temprano de ratón usando el mismoanticuerpo.

Palabras clave: células germinales primordiales, EMA-1, anticuerpo monoclonal, marcador de célula, embrión de polluelo, línea germinal.
Introducción

La líneagerminal, si bien está vista como una continuidad de células totipotentes o una línea celular recientemente formada partiendo de elementos somáticos de cada embrión, es, por definición, el único enlace entre generaciones subsecuentes. Por consecuencia de su rol único en el ciclo celular, el desarrollo de células de la línea germinal es particularmente intrigante, especialmente con respecto alentendimiento de su determinación, origen y relación a células somáticas. Referirse a estos temas requiere la habilidad de reconocer, y últimamente, manipular células germinales en desarrollo temprano.
Ni la morfología ni los marcadores PAS pueden distinguir células primordiales aviarias (PGCs) previas a la gastrulación cuando aparecen en el creciente germinal. La investigación del origen de las PGCsse limita generalmente a estudios indirectos in vitro en los cuales quimeras de polluelos de codorniz se construyen, usando epiblastos e hipoblastos de especies diferentes o por cultura de hipoblastos y epiblastos isolados hasta que las PGCs se puedan reconocer por marcación PAS. Estos estudios concluyeron que las PGCs derivan del epiblasto en etapas previas a ellas que son identificables tantopor criterios morfológicos o histoquímicos, y que el endodermo germinal creciente del hipoblasto es una locación secundaria en el desarrollo de una PGC.
Para investigar directamente el origen de las PGCs in situ, un marcador celular germinal en etapas previas a la etapa en la cual son morfológicamente distintas. En este estudio, usamos el anticuerpo EMA-1 como un marcador PGC en embriones depolluelo. EMA-1, un anticuerpo monoclonal IgM producido en contra de una glicoproteína antígena de la superficie celular del carcinoma embrional Nulli SCC1, reconoce grupos de carbohidratos polilactosamina fucosilados y ha sido demostrado previamente que etiqueta PGCs murinas. Demostramos, aquí, que EMA-1 marca células germinales de polluelo en una etapa temprana y por un periodo más largo que elmarcador PAS, y proveemos evidencia adicional consistente con el origen de epiblastos de PGCs en el polluelo.

Materiales y métodos

Huevos blancos fértiles de “leghorn” fueron comprados de un proveedor de un local comercial (Donsing, Rio Linda, California). Los huevos se incubaron a 37,5°C y 55% humedad relativa.
Estudios inmunohistoquímicos o inmunofluorescentes usango el anticuerpo...