ANÁLISIS ESPECTROFOTOMÉTRICO DE LA RIBOFLAVINA.


ANÁLISIS ESPECTROFOTOMÉTRICO DE LA RIBOFLAVINA.

OBJETIVOS:
Se realizará un sencillo análisis espectrofotométrico de la vitamina riboflavina consistente en la obtención del espectro deabsorción.
Al mismo tiempo con los datos obtenidos se construirá una curva patrón para verificar la ley de: “Lambert-Beer”, calcular el coeficiente € y determinar la concentración de una muestra deriboflavina de concentración desconocida.
PARTE EXPERIMENTAL:
1-Encender el instrumento y esperar unos 10 minutos antes de proceder a la medición. A continuación seleccionar el modo Absorbancia.2-Seleccionar la longitud de onda deseada. Calibrar a cero de absorbancia.
3-A continuación se mide la absorbancia del blanco.
4-Para leer a otras longitudes de onda calibrar a cero nuevamente.
A) Espectrode absorción de riboflavina
1-Preparar 25 ml de riboflavina 50 μM en tampón fosfato 20 mM (pH 7,0).
2-Realizar medidas de absorbancia de la dilución de riboflavina contenida en el tubo 5, en elintervalo de longitudes de onda comprendido entre 340 y 500 nm a intervalos de 10 nm, utilizando el tubo 1 para calibrar el colorímetro y tabular los resultados en la siguiente tabla.

1- Realizar elespectro de absorción representando absorbancia (A) frente a longitud de onda (λ).
2-Seleccionar el máximo de absorción (λ máx), a partir del espectro.
B) Curva estándar para la riboflavina
1-Apartir de la solución madre de riboflavina preparar diluciones, tal como se indica en la tabla siguiente:


2-Medir la absorbancia de cada disolución a 450 nm y completar la tabla anterior incluyendolos resultados de esas medidas.
3-Construir la curva patrón representando A (450 nm) frente a las respectivas concentraciones. NOTA: En condiciones normales de laboratorio sería necesario realizar lasdeterminaciones de las disoluciones de riboflavina por triplicado y representar la absorbancia promedio para cada concentración.
4-Calcular ∈ a partir de la curva estándar de riboflavina....