Analisis de bradford

Determinación de la concentración de la proteína por el análisis de Bradford
Un procedimiento simple para la determinación de la concentración de la proteína en soluciones es el análisis de laproteína de Bradford que fue descrito primero por Bradford (Bradford y otros, 1976).
Una valoración de la concentración de la proteína es esencial ser hecho rápidamente y exactamente en muchos campos delestudio de la proteína. El análisis de Bradford se ha convertido en el método preferido para cuantificar la proteína en muchos laboratorios. Esta técnica es más simple, más rápidamente, y más sensibleque el método de Lowry. Además, en comparación con el método de Lowry, está conforme a menos interferencia por los reactivo comunes y los componentes sin proteínas de muestras biológicas.
Se basa enla unión de un colorante hidrofóbico, Comassie Blue G-250 a las proteínas. Soluciones acuosas en presencia de ac. fosfórico tienen un color pardo, pero al encontrarse en el entorno hidrofóbico delinterior de una proteína, origina un color azul intenso.
Bajo condiciones fuertemente ácidas, la forma estable del colorante es la doblemente protonada que absorbe a 465 nm. Mientras que al unirse aproteínas la forma estable es la desprotonada, de color azul que absorbe a 595 nm.

La cantidad de proteína puede ser estimada determinando la cantidad de tinte en la forma azul. Esto se logramidiendo la absorbancia de la solución a 595 nm.
El tinte aparece atar lo más fácilmente posible al arginyl y a los residuos lisiles de proteínas. Esta especificidad puede llevar a la variación en larespuesta del análisis a diversas proteínas, que es la desventaja principal del método. El análisis de Bradford de la original muestra la variación grande en respuesta entre diversas proteínas. Variasmodificaciones al método se han desarrollado para superar este problema.
Para determinar la concentración de proteína total presente en una muestra se requiere la preparación de una curva de...