Analisis De Clar (Hplc)

Análisis de los resultados

Los métodos cromatográficos están siendo muy ampliamente utilizados en el campo de la química analítica. Esta técnica consiste básicamente en la separación de moléculas, por medio de una columna cromatográfica la cual se encuentra rellena de una fase estacionaria con un tamaño de poro determinado y unas propiedades químicas particulares. Por esta fase estacionariase hace pasar la fase móvil en la cual se encuentra el analito, esta fase móvil es inmiscible con la fase estacionaria. En este caso la fase estacionaria es apolar y la fase móvil es polar, entonces se dice que es una cromatografía en fase reversa. La separación depende de las propiedades químicas de las moléculas, es decir, si la molécula es mas retenida por la fase estacionaria seria más lentosu recorrido por la columna, mientras que la molécula menos retenida por la fase estacionaria su movimiento seria más rápido (la molécula más polar es menos retenida y la molécula mas apolar es más retenida). Debido a estas diferencias en movilidad los componentes se separan en bandas discretas, que posteriormente se le pueden realizar análisis cualitativos o cuantitativos.

En esta práctica sedeterminó cafeína en varias muestras reales (café molido, bebida de café y una gaseosa), para esto fue necesario el uso de un equipo cromatográfico, para hacer la separación de la cafeína de el resto de componentes que lleva una muestra real. Para llevar a cabo esta separación se uso una técnica analítica denominada CLAR (cromatografía liquida de alta resolución). Esta es una técnica eficaz en elcual la fase móvil es un líquido, y la fase estacionaria es un sólido y se puede decir también que es una cromatografía L-S. A cada muestra fue necesario hacerle una preparación adecuada, para evitar interferencias y/o para evitar que el equipo sufriera un daño posterior. A la muestra de café molido, se mezcló con una solución de agua: metanol (4: 1) para facilitar la dilución de la cafeína quees nuestro analito de interés, esta mezcla heterogénea se llevó a un sonicador, que es un instrumento el cual genera intensas ondas sónicas en medio liquido, primero se trasmite una corriente eléctrica a un sistema mecanico que la convierte en un sistema de alta intensidad generando ondas ultrasónicas y forman millones de micro burbujas que se expanden y colapsan contra las células. El sonicadorpor medio de sus radiofrecuencias, permite una mayor disolución de la muestra, porque se encarga de fragmentar mucho más las partículas en suspensión, dando así un mayor contacto del solvente con la superficie del café molido, además de que estas ondas permiten una mayor penetración del solvente por los poros del café molido, facilitando así una mayor disolución de esta mezcla. El sonicador operade dos maneras la primera es por pulsos donde las vibraciones son transmitidas en un rango de 0,1 a 0,9 pulsos por segundo permitiendo una adecuada sonicacion sin generar mucho calor y continuo que puede ser usado hasta por 15 min se usa para moléculas como levaduras pero genera mucho calor. Luego se enrasó con agua desionizada. La segunda muestra, una bebida gaseosa, en este caso una coca-cola, sedesgasificó con el sonicador, y luego se enrasó con agua desionizada. Por último la muestra bebida de café se diluyo 20 veces su volumen con agua desionizada. La forma de introducir las muestras al instrumento, es por medio de viales, porque el instrumento es automatizado. Los viales se llenan de muestra o sustancia a anlizar con una jeringa que posee un cabezal el cual está provisto de unfiltro de membrana con tamaño de poro de xxx que se debe reemplazar cada vez que se utilice.
La filtración es muy importante porque si una partícula llegara a pasar hasta la bomba, esta se alojaría entre el pistón y el empaque de la bomba, ocasionando unos rasguños al empaque y la bomba quedaría con agujeros. Las muestras deben de estar libres de gases, ya que estas burbujas pueden dañar la...