analisis de proteinas

4. Tablas de datos y resultados
Harina empleada: Arveja
Peso de la harina: 2,006 gramos
Volumen de cada fracción (Albúminas, Globulinas, Prolaminas y Gluteinas): 25 ml
4.1 Método de Kjeldahl
Peso de la harina para la extracción muestra 1: 39 mg
Peso de la harina para la extracción muestra 2: 37 mg
Volumen de la alícuota analizada: 5,00 ml
Blanco de los reactivos: Volumen de HCl:3,10ml
N HCl: 0,0114N

Volumen de HCl
% de Nitrógeno
Porcentaje de Proteína
Harina Completa
3,46 ml
0,1473
0,9208

3,78 ml
0,2933
1,5332
Albúminas
23,65 ml
0,9189
5,7259
Globulinas
26,68 ml
1,0368
6,48
Prolaminas
12, 6 ml
0,4766
2,98
Glutelinas
8,65 ml
0,3194
1,9965

Cálculos:

% Proteína Bruta = %Nt x 6,25
a) Parala harina completa:



% Proteína Bruta =

b) Para una de las fracciones analizadas:



% Proteína Bruta =

4.2 Método de Biuret
Curva de Calibración: Concentración del patrón de caseína 5 mg/ml
Tubo
B
1
2
3
4
5
6
7
Concentración mg/ml
0
0,07143
0,2143
0,3571
0,5
0,6428
0,8571
1,0714**
Absorbancia 540 nm
0,001*
0,006
0,035
0,105
0,122
0,156
0,2390,268**

* Para graficar los valores de absorbancia en la gráfica 4.2.1 se le restó el valor de la absorbancia del blanco a cada absorbancia obtenida de los tubos 1 al 7.
*Dato 7 no se metió en la curva de calibración por razones explicadas en la discusión de resultados.
Gráfica 4.2.1 Curva de calibración empleando como patrón caseína 5 mg/ml para determinación de proteína total por el método deBiuret.



Muestra
Albúminas
Globulinas
Glutelinas
Prolaminas
Tubo
8
9
8
9
8
9
8
9
Absorbancia 540 nm
0,114
0,239
0,049
0,181
0,054
0,099
0,011
0,054
% Proteína
7,96
7,75
4,04
3,59
4,34
3,53
1,74
2,23

Muestra de cálculos para el método de Biuret:

Ecuación general Tubos 8 % Proteína:
Ecuación general Tubos 9 % Proteína:
Ej:



Nota: Todas losfactores de dilución se tomaron en cuenta, partiendo que no se adicionaron 3 ml del Reactivo de Biuret como se indica en las guías sino 5 ml del reactivo.
4.3 Método de Bradford
Curva de Calibración: Concentración del patrón de caseína 5 mg/ml
Tubo
B
1
2
3
4
5
6
Concentración mg/ml
0
0,080
0,160
0,300
0,400
0,600
0,800
Absorbancia 595 nm
0,000
0,260
0,412
0,591
0,6590,790
0,902







Gráfica 4.3.1 Curva de calibración empleando como patrón caseína 5 mg/ml para determinación de proteína total por el método de Bradford.

Gráfica 4.3.2 Curva de calibración para el método de Bradford empleando únicamente los datos de los tubos 1, 2 y 3.

Gráficas 4.3.3 y 4.3.4 Logaritmo de la concentración del patrón en función de la absorbancia, y a partir de lapendiente obtenida, linealización de la gráfica 4.3.1




Muestras


Dilución
Absorbancia
595 nm
% Proteína



Gráfica 4.3.2
Gráfica 4.3.4
Prolaminas
Sin diluir
0,056
--
0.774


1 a 100
0,027
--
--


1 a 10000
0,031
--
--
Glutelinas
Sin diluir
0,248
6.22 %
2.99 %

1 a 100
0,020
--
--

1 a 10000
0,006
--
--



Muestra de cálculos:
a) Mediantelinealización con datos de los tubos 1, 2 y 3


Glutelinas sin diluir
Factor de dilución:
% Glutelinas = 6.22 %
Nota: Los demás valores no pueden ser calculados ya que la linealización no permite extrapolar valores tan pequeños de absorbancia o de lo contrario da un valor negativo de proteína.
b) Mediante linealización con la gráfica 4.3.4



Factor de dilución:
% Glutelinas = 2.99%
Nota: Por este método se pudo hallar únicamente las glutelinas y prolaminas sin diluir.
4.4 Método de Absorción en el Ultravioleta
Curva de Calibración: Concentración del patrón de caseína 5 mg/ml
Tubo
B
1
2
3
4
5
6
Concentración mg/ml
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
Absorbancia 280 nm
0,000
0,151
0,309
0,466
0,628
0,773
0,934





Gráfica 4.4.1 Curva de...