Analisis Espectrofotometrico De Un Sistema Multiple

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA

CURSO PRACTICO DE MÉTODOS DE ANÁLISIS

VERIFICACIÓN DEL BUEN FUNCIONAMIENTO DE UN ESPECTROFOTÓMETRO

GUISCAFRE RODEA FRANCISCO JAVIER

VERIFICACIÓN DEL BUEN FUNCIONAMIENTO DE UN ESPECTROFOTÓMETRO
OBJETIVOS
El alumno:
a) Evaluara el rendimiento instrumental de un espectrofotómetrob) Verificara la exactitud de la escala de la longitud de onda, la presencia de radiación dispersa, el ancho de banda, la exactitud fotométrica, la proporcionalidad de respuesta y el rendimiento global del instrumento.
RESULTADOS
Exactitud de la escala de la longitud de onda
MAXIMOS DEL FABRICANTE.
444, 468, 481, 512, 575
MINIMOS DEL FABRICANTE
540, 490

Tabla 1 Espectro detransmisión del filtro de didimio.
Longitud de onda(nm) | %T | Longitud de onda(nm) | %T |
400 | 11.4 | 500 | 48 |
410 | 23.6 | 510 | 56 |
420 | 36.2 | 520 | 54.4 |
430 | 50 | 530 | 41.2 |
440 | 56.4 | 540 | 30.8 |
450 | 53 | 550 | 30.6 |
460 | 46.4 | 560 | 46.8 |
470 | 46.6 | 570 | 62.6 |
480 | 46.8 | 580 | 58 |
490 | 44.8 | 590 | 35.2 |


Grafica 1. Espectro de Transmisióndel filtro de de didimio.
Los valores experimentales si concuerdan con los valores de referencia dados por el fabricante, hay unas pequeñas discrepancias en algunos del los resultados como en el máximo 468 o el mínimo 540 que en nuestros resultados mostro una desviación de 10 nm, pero ya que son los únicos errores mostrados se puede deber mas a un error de manejo del aparato o que este presentaerror a esta longitud de onda.
Tabla 2. Espectro de transmisión de la solución de NiSO4H2O al 20%
MAXIMOS DEL FABRICANTE.
520
MINIMOS DEL FABRICANTE
410

Longitud de onda(nm) | %T | Longitud de onda(nm) | %T |
380 | 29.6 | 490 | 74.8 |
390 | 14.4 | 500 | 84.6 |
400 | 5.8 | 510 | 89.8 |
410 | 3.6 | 520 | 92.6 |
420 | 3.8 | 530 | 92.2 |
430 | 5.4 | 540 | 90.4 |
440 | 10.8 |550 | 87.8 |
450 | 23.2 | 560 | 85.6 |
460 | 41 | 570 | 82 |
470 | 55.2 | 580 | 72.8 |
480 | 65.2 | 590 | 73 |

Grafica 2. Espectro de transmisión del filtro de la solución de NiSO4H2O al 20%

La máxima y mínima Longitud de onda concuerdan con los valores de referencia dados por el fabricante lo que indica que la longitud de onda del espectrofotómetro si está bien calibrada.
El métodoempleado para estimar la exactitud de la escala de la longitud de onda nos permite saber con certeza y de manera sencilla el desplazamiento que presenta la escala o si esta bien calibrado el espectrofotómetro, aunque el método es un poco tardado.

Proporcionalidad fotométrica.
Tabla 3 Proporcionalidad entre A y λ para NiSO4H2O al 20%
Longitud de onda(nm) | Absorbancia |
530 | 0.033 |540 | 0.044 |
550 | 0.056 |
560 | 0.067 |
570 | 0.086 |

Grafica 3. Proporcionalidad entre Ay λ para NiSO4H2O al 20%

La absorbancia es directamente proporcional a la longitud de onda para este intervalo (530-570 nm)
Exactitud fotométrica.

Tabla 4. Exactitud fotométrica. Método del NiSO4H2O al 20%

PARAMETRO\LONGITUD DE ONDA | 400 nm | 510 nm |
Absorbancia esperada | 1.7 | 0.09|
Tolerancia aceptada | (.4 a 3) | (-1.21 a 1.39) |
Absorbancia medida | 1.2 | 0.047 |


Para el método de vidrio neutro el valor se encuentra por encima del intervalo de tolerancia por lo que el espectrofotómetro no tiene exactitud fotométrica aunque en el método de la solución de NiSO4H2O al 20% los valores obtenidos si se encuentran dentro del intervalo de tolerancia.

¿Qué otrosmétodos se utilizan comúnmente para verificar la exactitud fotométrica en el UV-VIS?
Se utilizan otras sustancias como:
-Dicromato de potasio en HClO4 0.001 N con absorbancia certificada. (a 340 nm)
- Soluciones de sales de Co (H2o)6 +2 en SO4H2 0.47 N con absorbancia certificada a 505 nm.
- Soluciones de cianmetahemoglobina con absorbancia certificada a 540 nm

¿Qué puede ocurrir con la...