Analisis Microbiologico De Equipos Y Superficies Hisopo)

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GUIA LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
CENTRO AGROPECUARIO DE BUGA

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ANALISIS MICROBIOLOGICO DE EQUIPOS Y SUPERFICIES HISOPO)

(METODO TORULA O

Los métodos de monitoreo microbiológico serán el método de la placa por contacto y la técnica del hisopo o tórula (usar uno u otro). El método de placa es aplicable sólo a superficies planas. El método de hisopo otórula puede ser usado en todo tipo de superficies inertes e irregulares, tales como bandejas, mesas de trabajo, utensilios, cuchillas de equipos, embutidora, cortadora, tolvas, pisos, paredes entre otros. La utilización de estos métodos se limita al análisis de superficies limpias, desinfectadas y secas. En el caso de no poder obtener superficies secas, se deberá utilizar el método de hisopo dealgodón seco. OBJETIVO Conocer la carga microbiana en una superficie determinada en un volumen conocido de líquido. MATERIALES       Plantilla con material resistente a corrosión (por ejemplo un marco en acero inoxidable de 20 cm2 a 100 cm2). Tórula estéril de algodón no absorbente de 0,5 cm de diámetro por 2 cm de largo sobre un aplicador de madera de 12 a 15 cm de largo. Tubo de ensayo contapa (con 10 ml de agua peptonada 0,1% más solución neutralizante según el caso) Cajas de Petri. Pipetas estériles de 1 y 10 ml. Medio de transporte si es requerido (nevera o caja con aislamiento capaz de mantener la muestras entre 1 °C y 4 °C durante el transporte al laboratorio.

REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO       Agar de recuento en placa, si es requerido Agar Eosina Azul de Metileno, sies requerido Agar OGY, si es requerido Líquido de dilución (agua peptonada 0.1% ) Plantilla estéril de un área interna de 20 - 100 cm2 Guantes desechables

Nota: Si se muestrea superficies que han sido higienizadas, se debe usar el diluyente con líquidos neutralizantes (tabla 1)

Instructora Gloria Liliana Lozano

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Sustancia Cantidad (g/l) Tween 80 (polisorbato 80) 30 Lecitina 3 Tiosulfato de sodio 5 L-histidina 1 Saponina 30 Tabla. 1. Fórmula universal para neutralizantes PROCEDIMIENTO 1. Colocar la plantilla de 20 - 100 cm2 (previamente esterilizada) sobre la superficie a muestrear 2. Humedecer el hisopo en la solución diluyente y presionar ligeramente en la pared deltubo con un movimiento de rotación para quitar el exceso de solución. 3. Con el hisopo inclinado en un ángulo de 30º, frotar cuatro veces la superficie delimitada por la plantilla, cada una en dirección opuesta a la anterior. Asegurar el hisopado en toda la superficie. 4. Colocar el hisopo en el tubo con la solución de agua peptonada 0.1%, quebrando la parte del hisopo que estuvo en contacto conlos dedos del muestreador, la cual debe ser eliminada. 5. Para superficies irregulares, en el caso de utensilios, se repetirá la operación con 3 utensilios más (total 4 como máximo), con el mismo hisopo, considerando el área que esta en contacto con el alimento o con la boca. 6. Conservación y transporte de la muestra Las muestras se colocarán en un contenedor isotérmico con gel refrigerante, elcual se distribuirá uniformemente en la base y en los laterales, para asegurar que la temperatura del contenedor no sea mayor de 10ºC, a fin de asegurar la vida útil de la muestra hasta su llegada al laboratorio. El tiempo de transporte entre la toma de muestra y la recepción en el laboratorio estará en función estricta de dicha temperatura, no debiendo exceder las 24 horas y excepcionalmente las 36horas. Se deberá registrar la temperatura del contenedor al colocar las muestras y a la llegada al laboratorio con la finalidad de asegurar que las mismas hayan sido transportadas a la temperatura indicada. Las temperaturas superiores a 10 ºC invalidan la muestra para su análisis. 7. Agito el tubo con la muestra para lograr una buena homogenización. Si se presume de números elevados de...