analisis

 PROCEDIMIENTO PARA LA TINCION DE GRAM

Recoger muestras.
Hacer el extendido con un palillo de madera.
Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando unmechero.
Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado tres veces aproximadamente).
Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar unminuto.
Enjuagar con agua.
Agregar lugol y esperar un minuto aproximadamente.
Enjuagar con agua.
Agregar alcohol acetona y esperar entre 5 y 30 segundos según la concentración delreactivo (parte crítica de la coloración). (las Gram - se decoloran, las Gram + no)
Enjuagar con agua.
Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar un minuto. Estetinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas. Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersiónProcedimiento Tinción de Ziehl-Neelsen
Esta técnica puede realizarse tanto en muestras histológicas como citológicas. Para demostrar la presencia de BAAR en cortes de tejido en parafina. Losreactivos necesarios para su realización son los siguientes:
1. ácido peryódico 58%
2. carbol fucsina de Ziehl culina (fucsina fenicada). Preparar mezclando en el orden dado:
1. 0,5 gfucsina básica
2. 50 ml agua destilada
3. 5 ml etanol absoluto
4. 28,5 g cristales de fenol derretidos
3. hematoxilina
4. alcohol ácido 1%:
1. alcohol de 35º
2. ácidoclorhídrico
El procedimiento es el siguiente:
1. Desparafinar e hidratar los cortes
2. Acido periódico 5%, 10 min
3. Lavar con agua destilada
4. Fucsina fenicada, 15 min
5. Decolorar enalcohol ácido al 50%
6. Lavar con agua destilada
7. Hematoxilina, 10 min
8. Azulidificar con, por ejemplo, carbonato de litio
9. Deshidratar, aclarar y montar preparaciones