Analitica

CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS
DE ALTA RESOLUCIÓN HPLC..
PRESENTADO POR.
Andrés Jordán
Ximena Echeverri

CROMATOGRAFIA
La cromatografía comprende un conjunto de técnicas que tienen como finalidad la separación de
mezclas basándose en la diferente capacidad de interacción de cada componente en otra sustancia.
Consiste en pasar una fase móvil (una muestra constituida por una mezcla que contiene elcompuesto deseado en el disolvente) a través de una fase estacionaria fija. Cada uno de los
componentes de la mezcla presenta un tiempo característico de paso por el sistema,
denominado tiempo de retención.
Cuando el tiempo de retención del compuesto difiere del de los otros componentes de la mezcla,
éste se puede separar mediante la separación cromatografía.

La cromatografía puede cumplir dosfunciones básicas que no se excluyen mutuamente:
• Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos más puros y que puedan ser usados
posteriormente (etapa final de muchas síntesis).
• Medir la proporción de los componentes de la mezcla (finalidad analítica). En este caso, las
cantidades de material empleado son pequeñas.

Cromatografia liquida de alta eficiencia HPLC ( High Performance LiquidChromatography)
La cromatografía de líquidos de alta resolución, es un modo de cromatografía en el cual el proceso
de separación y transferencia de masa es entre la fase estacionaria y la fase móvil, a una temperatura
dada. La separación cromatografía en HPLC es el resultado de las interacciones específicas entre las
moléculas de la muestra en ambas fases, móvil y estacionaria
La fase móvil es unlíquido que fluye a través de una columna que contiene a la fase fija. Una fase
móvil líquida interactiva, otro parámetro se encuentra disponible para la selectividad, en adición a
una fase estacionaria activa.
La HPLC es capaz de separar macromoléculas y especies iónicas, productos naturales lábiles,
materiales poliméricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de alto peso molecular.Instrumentación

Figura No. 1.
Diagrama de bloques que muestra los componentes de un aparato de HPLC típico.

Clasificación de la cromatografía liquida HPLC
Los tipos de cromatografía liquida de alta resolución suelen clasificarse según el mecanismo de
separación o el tipo de fase estacionaria, estos comprenden:
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Cromatografía de reparto o de liquido-liquido.
Cromatografía deabsorción o de liquido-solido.
Cromatografía de intercambio de iones o iónica.
Cromatografía de exclusión molecular.
Cromatografía de afinidad.
Cromatografía quiral.

1.

Cromatografía de reparto de alta resolución

En este tipo de cromatografía de HPLC la fase estacionaria es un segundo liquido miscible con la fase
móvil liquida.
Según la forma de mantener la fase estacionaria sobre laspartículas de soporte de empaquetamiento la
cromatografía de reparto se puede dividir en:
•. Liquido- Liquido: la fase estacionaria es un disolvente que se mantiene en su sitio por absorción sobre
la superficie de las partículas del empaquetamiento.
•. Liquido – Fase enlazada: La fase estacionaria es una especie orgánica que se adhiere a la superficie de
las partículas de empaquetamiento mediante enlacesquímicos.(mayor estabilidad)
Se pueden distinguir dos tipos de cromatografía de reparto según la polaridad relativa de las fases móvil y
estacionaria:
•. Fase normal: fase estacionaria polar y fase móvil apolar. El componente menos polar eluye primero.
•. Fase reversa: fase estacionaria apolar y fase móvil disolvente relativamente polar. Ocurre primero la
elución del componente mas polar.

2.Cromatografía de absorción de alta resolución

La fase estacionaria es la superficie de un solido polar finamente dividido. Con una superficie que
interactúa con los compuestos a separar y con a fase móvil.
Los solidos utilizados como fase estacionaria
Útil por su capacidad de resolución de mezclas de isomeríos
El analito compite con la fase móvil con la fase móvil por los sitios sobre la...