Antesedentes Selección In Vitro De Plantas Tolerantes Al

SELECCIÓN IN VITRO DE PLANTAS TOLERANTES A
PLOMO PARA SU USO EN FITORREMEDIACION

TESIS
SELECCIÓN IN VITRO DE PLANTAS TOLERANTES A
PLOMO PARA SU USO EN FITORREMEDIACION
PARA OBTENER EL GRADO DE ESPECIALISTA EN
BIOTECNOLOGIA


P R E S E N T A

FATIMA KARMINA SALAS SALMERON



Objetivo general

Evaluar la tolerancia y acumulación de plomo por diferentes especies vegetales, en unsistema
in vitro, para la selección de plantas con potencial para la fitorremediación de suelos.

Objetivos particulares

• Recolectar especies vegetales que crecen en sitios contaminados con metales, y establecer las condiciones específicas para su germinación in vitro.
• Establecer las condiciones específicas para el análisis de plomo en tejidos vegetales (raíz,hojas y tallo)• Evaluar el efecto de diferentes concentraciones de un agente quelante (EDTA) en el crecimiento de las plantas en estudio, en un sistema in vitro.
• Evaluar el efecto de diferentes concentraciones de plomo sobre el crecimiento, tolerancia y capacidad de acumulación de las plantas en estudio, en un sistema in vitro.
• Seleccionar la(s) especie(s) vegetal(es) más adecuada(s) para lafitorremediación de suelos contaminados con plomo, con base en su crecimiento y capacidad de acumulación en tejidos.


RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Especies en estudio
De las semillas recolectadas se seleccionaron cuatro especies para realizar los ensayos de germinación, acumulación y crecimiento en presencia de plomo: Acacia farnesiana Willd,Dodonea viscosa Jacq., Heteroteca inuloides Cass y Seneciosalignus DC. Estas cuatro especies pertenecen a familias para las cuales se ha reportado un gran número de géneros de plantas hiperacumuladoras (Prasad y Freitas 2003). En la


Tabla 5 se presentan las características más importantes de cada especie.











5.2. Selección de condiciones para cultivos in vitro






La mejor manera de escarificar las semillas con testa dura(A. farnesiana y D. viscosa) fue la forma manual, que consiste en cortar o perforar un fragmento de la testa de la semilla. Uno de los métodos químicos utilizados fue el remojo de la semilla en ácido sulfúrico concentradodurante 30 y 45 minutos; sin embargo, éste no fue eficiente para las semillas de huizache. Para las otras dos especies, no fue necesario ningún tipo de escarificación.Para ladesinfestacion de las semillas, el mejor método resultó el lavado con detergente en polvo durante 20 min para H. inuloides y S. salignus, y durante 30 min para A. farnesiana y D.viscosa. Posteriormente, las semillas se colocan en una solución de etanol al 70% durante 20 s para H. inuloides y S. salignus y por 30 s para A. farnesiana y D. viscosa. Se enjuagan con agua desionizada estéril y se colocanen una solución al 10% (p/v) de hipoclorito de sodio con dos gotas de Tween 20, durante 30 min, para finalmente enjuagar varias veces con agua desionizada estéril.

Análisis y cuantificación de plomo en plantas

➢ Digestión de muestras vegetales

Con el objeto de mejorar y estandarizar la digestión de muestras vegetales, así como para disminuir interferencias asociadas al contenido demateria orgánica de las mismas, que impiden la correcta medición de plomo por EEA, se evaluaron diferentes condiciones para la digestión ácida por microondas. Algunos autores recomiendan el uso de 0.4 - 2.0 ml de HNO3 para digerir 200 mg de muestra (Kotz, y col., 1972; Kotz y col., 1979; Stoeppler y col., 1979). Sin embargo,tanto las mezclas de agentes de extracción como las cantidades de muestra adigerir varían significativamente entre las referencias revisadas. En la Figura 3 se muestra la eficiencia de extracción de plomo obtenida para cada condición de digestión utilizada, las cuales se describen en la
Tabla 2 (Métodos y Materiales).


















Figura 3. Concentraciones de plomo obtenidas por EAA-HG, en función de las condiciones de digestión de muestras...