Antibiograma

Introducción
Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes.
Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una via metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecerincorpora o no.
Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de multiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo en estudio.
De la amplia variedad de pruebas bioquímicas, nosotros en laboratorio utilizaremos 10, aplicados a 5 especies de microorganisos.
Además estudiaremos los resultados que estos test arrojan, comparando resultados experimentalesentre los distintos grupos de trabajo de nuestro laboratorio.
Objetivos
* Realizar el experimento adecuadamente y poder identificar -aplicando éste método- distintos microorganismos.
* Debemos conocer cual de los test que componen las pruebas bioquímcas es o son el (los) adecuado(s) de acuerdo a la circunstancia que necesitemos estudiar.
* Entender los principios bioquimicos de laspruebas.
* Ser capaces de interpretar adecuadamente los resultados entregados por laspruebas bioquímias
* Conocer el uso de las pruebas bioquímicas para la identificación de microorganismos
* Identificar errores de procedimiento en el laboratorio al realizar los experimentos y poder reconocer en que partes del procedimiento se cometió el o los errores, para así, mediante el desarrolloexperimental conocer mas profundamente las pruebas bioquímicas.
 Prueba de la Oxidasa
El objetivo de la prueba “Oxidasa” es buscar la presencia de la enzima Citocromo C oxidasa.
Se trata de un enzima que oxida el citocromo C de la cadena transportadora de e-. Este se detecta utilizando el tetra para fenilendiamina: el reactivo de oxidasa contiene este compuesto que va a ser oxidado por lacitocromo C oxidasa. En estado reducido es incolora, pero cuando se oxida vira a púrpura.
Procedimiento:
Con un pequeño papel de filtro añadimos reactivo de Kovacs, lo impregnamos y a partir del tubo con la bacteria problema tomamos un poco con el asa de platino y ponemos en el papel. Tras unos 30 segundos, observamos si ha ocurrido algún cambio.

Las bacterias que dan positivo a esta prueba tienengeneralmente un ciclo respiratorio oxidativo.
Se considera positva esta prueba cuando toma un color púrpura la muestra.
Resultados:
(+) Pseudomonas aeruginosa
( - ) Escherichia coli
 Prueba de la Catalasa
El Objetivo es buscar la presencia de la enzima catalasa
El peróxido de hidrógeno se produce al utilizar la bacteria el azúcar por vía oxidativa. Al ser éste un compuesto muy oxidantelas bacterias la eliminan mediante la producción de la enzima catalasa (H2O2 -> H2O + ½ O2).
Prodecimiento:

Agregamos aproximadamente 5 ml. de peróxido de hidrógeno al 3% a un tubo de ensayo previamente esterilizado a continuacion tomamos una muestra de la cepa del microorganismo a estudiar y la introducimos por el tubo de ensayo, la muestra solamente debe acercrse a la muestra de la solucionliíquida de peróxido de hidrogeno y debemos observar la reacción de esta.

La prueba se considera como positiva si observamos burbujas de oxígeno.
Resultados:
(+) Staphylococcus aureus
( - ) Streptococcus spp.
 Prueba de la Coagulasa
La coagulasa es un enzima capaz de desnaturalizar la bibrina del plasma. El objetivo es buscar en factor de aglutinación de los microorganismos cuandoestos se mezclan con el plasma. Esta prueba se utiliza para diferenciar microorganismos del genero Staphylococcus.
Procedimiento:
Preparamos una mezcla de 0,1 ml. de CCC (caldo cerebro corazon) y 0,3 ml. de plasma de conejo en un tubo de ensayo previamente esterilizado. La muestra ya contiene cepas de St. Aureus. Tapamos el tubo de ensayo con algodón hidrofílico y lo llevamos a baño María a 37° C...