ANTIGENOS Y ANTICUERPOS MARCADOS 1

INMUNOLOGIA
ANTIGENOS Y ANTICUERPOS MARCADOS
*INMUNOFLUORESCENCIA (IF): Técnica útil para identificar en la superficie moléculas, en la cual un compuesto llamado FLUOROCROMO está unido covalentemente a un Ac sin que éste interfiera en su capacidad de unirse a la molécula.
Técnica que nos permite evidenciar la reacción Ag-Ac pero en este caso se van a usar Ac marcados con una sustancia llamadaFLUOROCROMO que tiene la particularidad de emitir fluorescencia cuando son estimulados a una longitud de onda mayor. Cuando el Ac se une al Ag y se observa al microscopio de luz UV va a emitir luz se ve un color verde. (DICHO POR MIRIAM).
-DIRECTA: El Ac unido al fluorocromo reacciona directamente con el Ag visualizándose al microscopio luz Uv y se utiliza para identificar Ag fijados en tejidos,secreciones o aislados por cultivos.
Se utiliza para determinar Ag que están presentes en tejidos o células, por ejemplo, microorganismos, cuando se necesita determinar una bacteria, se toma biopsia del tejido y luego a eso le agregamos un Ac marcado con fluorocromo que específico para el Ag. Al unirse el Ag con ese Ac, lo sometemos a la lámpara evidenciándose un color fluorescente. El Ag está en eltejido, hago una biopsia que se adhiere a una lámina y se le agrega el Ac con el fluorocromo (lo trae el kit) y se incuba para que se produzca la reacción Ag-Ac por 45m para que se unan, lavo para eliminar el exceso de Ac que no se unió y se lleva la lámina al microscopio, la lámpara tiene los fotones que se excitan y pasan de una longitud de onda menor a mayor indicando que hay Ag. (DICHO PORMIRIAM).
-INDIRECTA: Tiene 2 etapas. Permite determinar Ac. También se determinan Ac-Antinucleares para el diagnóstico lupus. PRIMERA ETAPA: Ac primario no marcado se une a una molécula específica (Ag). SEGUNDA: se utiliza un segundo Ac que está marcado con fluorocromo para evidenciar la reacción Ag-Ac. Es semi-cuantitativa.
Por ejemplo, si se desea determinar Ac-Anti-toxoplasmicos el kit ya tieneel tejido adherido con el Ag Anti-toxoplasmico y el Ac marcado con fluorocromo. PRIMERA: En lámina que ya trae el tejido con el Ag agrego el suero de la mujer embarazada que quiero saber si tiene Ac, se incuba por 45m para que se unan y se dé la reacción Ag-Ac, lavo. SEGUNDA: Agrego un segundo Ac que va a ser específico contra el primero, pero éste va a estar marcado con el fluorocromo. (DICHO PORMIRIAM).
*DEFINICIONES:
-FLUOROCROMO: Moléculas químicas que absorben en luz a una determinada longitud de onda y emiten a otra diferente. Se caracterizan por su espectro de excitación y de emisión, por lo que su utilización está condicionada con el tipo de lámpara del microscopio y de la longitud de onda a la que se excitan.
-FLUORESCENCIA: Es la capacidad que tienen algunas moléculas de emitirluz mientras están siendo tituladas de un modo adecuado.
-CONJUGADO FLUORESCENTE: Ac o Anti-sueros con especificidad conocida combinados con el fluorocromo.
-SUSTRATO: Diferentes células o tejidos que contienen el Ag involucrado en la reacción Ag-Ac.
*TIPOS DE FLUOROCROMOS:
-FITC (Isocianato de Fluoresceína): se excita con luz azul a 495nm y emite a 520nm.
-PE (Ficoeritrina): se excita a 480nm yemite a 578nm.
-TRICT (Isocianato de Tetramil-Rodamina): se excita a 640nm y emite a 570nm.
PARA MARCAR ACIDOS NUCLEICOS SE UTILIZAN EL DE YODURO DE PROPIDIO Y NARANJA DE ACRIDINA.
*LO POSITIVO SE VE VERDE FLUORESCENTE Y LO NEGATIVO ROJO.*
*ELISA: Permite detectar Ag o Ac en una gran variedad de muestras biológicas (LCR. Orina, sangre). Utiliza una enzima conjugada a un Ag o Ac como marcador dela reacción Ag-Ac.
La unión Ag-Ac se pone de manifiesto por una reacción que convierte un sustrato incoloro en un producto coloreado y estos cambios pueden ser cuantificados y expresados como concentración de Ag o Ag dependiendo del método utilizado. El componente no marcado de Ag-Ac es adherido a un componente sólido, por ejemplo, la placa.
Son pruebas basadas en la utilización de ENZIMAS....