Análisis de colonias transformantes de PCR de colonias y cultivo
Páginas: 2 (359 palabras)
Publicado: 27 de julio de 2015
Universidad de Las Américas
Facultad de Ingenierías y Ciencias Agropecuarias
Ingeniería en Biotecnología
1. TEMA DE LA PRÁCTICA:Análisis de colonias transformantes de PCR de colonias y cultivo
2. NÚMERO DE LA PRACTICA: 6
3. INTRODUCCIÓN
La electroforesis es una técnica utilizada para la cuantificación de ácidos nucleicosy proteínas. Esta metodología permite separar las moléculas antes mencionadas a lo largo de un campo eléctrico a de acuerdo a su tamaño y carga eléctrica. Las biomoléculas migrarán desde el polonegativo al positivo. Todo esto se logrará mediante la adición del buffer TBE 1X. Además se deben preparar las mezclas con buffer de carga, este va contener SYBR el cual se va a intercalar con lamuestra.
El cultivo de colonias transformantes en un medio líquido permite la obtención masiva de las células de interés. Este cultivo debe contar con los nutrientes necesarios para el desarrollo de losmicroorganismos.
4. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Se prepararon tres muestras con: 2µL de buffer de carga + SYBR y 3 µL del producto de PCR. Las tres muestras eran: control, PCR provenientes de lamuestra madre y provenientes de la práctica anterior.
Por otro lado se realizó el cultivo de colonias transformantes en un medio líquido. Se adicionaron 5 mL del medio LB en tubos Corning estériles con 5 µLde ampicilina a 50 mg/L y una pequeña muestra del PCR provenientes de la muestra madre. Estos tubos Corning serán agitadas vigorosamente a 37° por 14-16 horas.
5. RESULTADOS
La corrida deelectroforesis mostraron que únicamente el producto de PCR proveniente de la muestra madre fue el correctamente transformado. La muestra obtenida anteriormente no asimilo de forma eficiente el vectorrecombinante.
El cultivo de células transformantes fue evidenciado en la turbidez que presentaba el medio en cual fueron colocadas previamente.
6. DISCUSIÓN
Los resultados obtenidos muestran que...
Facultad de Ingenierías y Ciencias Agropecuarias
Ingeniería en Biotecnología
1. TEMA DE LA PRÁCTICA:Análisis de colonias transformantes de PCR de colonias y cultivo
2. NÚMERO DE LA PRACTICA: 6
3. INTRODUCCIÓN
La electroforesis es una técnica utilizada para la cuantificación de ácidos nucleicosy proteínas. Esta metodología permite separar las moléculas antes mencionadas a lo largo de un campo eléctrico a de acuerdo a su tamaño y carga eléctrica. Las biomoléculas migrarán desde el polonegativo al positivo. Todo esto se logrará mediante la adición del buffer TBE 1X. Además se deben preparar las mezclas con buffer de carga, este va contener SYBR el cual se va a intercalar con lamuestra.
El cultivo de colonias transformantes en un medio líquido permite la obtención masiva de las células de interés. Este cultivo debe contar con los nutrientes necesarios para el desarrollo de losmicroorganismos.
4. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Se prepararon tres muestras con: 2µL de buffer de carga + SYBR y 3 µL del producto de PCR. Las tres muestras eran: control, PCR provenientes de lamuestra madre y provenientes de la práctica anterior.
Por otro lado se realizó el cultivo de colonias transformantes en un medio líquido. Se adicionaron 5 mL del medio LB en tubos Corning estériles con 5 µLde ampicilina a 50 mg/L y una pequeña muestra del PCR provenientes de la muestra madre. Estos tubos Corning serán agitadas vigorosamente a 37° por 14-16 horas.
5. RESULTADOS
La corrida deelectroforesis mostraron que únicamente el producto de PCR proveniente de la muestra madre fue el correctamente transformado. La muestra obtenida anteriormente no asimilo de forma eficiente el vectorrecombinante.
El cultivo de células transformantes fue evidenciado en la turbidez que presentaba el medio en cual fueron colocadas previamente.
6. DISCUSIÓN
Los resultados obtenidos muestran que...
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