Api ensayos bioquimicos estandarizados

ENSAYOS BIOQUIMICOS ESTANDARIZADOS (API20E)

Además de las fermentaciones de azúcares, existe una gran diversidad de ensayos bioquímicos que permiten identificar a un determinado organismo. No obstante, el desarrollo individualizado de un conjunto de estos ensayos es muy lento, y requiere la manipulación de gran cantidad de material, lo que a efectos prácticos los hace inviables enlaboratorios de análisis rutinarios. Para éstos, se han desarrollado sistemas miniaturizados que permiten el ensayo a gran escala y de forma sencilla de muchos ensayos bioquímicos simultáneos. Uno de estos ensayos es el denominado galería API20E, especialmente diseñados para Enterobacterias, pero que puede ser aplicado a otras bacterias. En nuestro caso, usaremos una galería de ensayo de este tipo paracaracterizar algunas reacciones bioquímicas de la bacteria problema.
Actividades a ensayar. La galería API20E consta de 10 reacciones específicas de fermentación para los azúcares y otras 10 reacciones de utilización de sustratos o presencia de determinadas enzimas según se detalla en el siguiente cuadro:
TESTS
SUBSTRATOS
REACCIONES/
ENZIMAS
NEGATIVO
POSITIVO
ONPGOrto-nitro-fenil-galactósido
-galactosidasa
incoloro
amarillo (1)
ADH
Arginina
arginina dihidrolasa
amarillo
rojo/naranja (2)
LDC
Lisina
lisina descarboxilasa
amarillo
naranja
ODC
Ornitina
ornitina descarboxilasa
amarillo
rojo/naranja (2)
(CIT)
Citrato sódico
utilización de citrato
verde-pálido/ amarillo
azul-verde/ azul (3)
H2S
Tiosulfato sódico
producción de sulfídrico
incoloro/ gris
depósitonegro
URE
Urea
ureasa
amarillo
rojo/naranja
TDA
Triptófano
triptófano deaminasa
amarillo*
marrón*
IND
Triptófano
producción de indol
anarillo*
anillo rojizo*
(VP)
piruvato sódico
producción de acetoína
incoloro*
rojo-rosa
(GEL)
gelatina de Kohn
gelatinasa
No difusión
difusión de pigmento negro
GLU
Glucosa
fermentación/Oxidación (4)
Azul/verdoso
Amarillo
MAN
Manitolfermentación/Oxidación (4)
Azul/verdoso
Amarillo
INO
Inositol
fermentación/Oxidación (4)
Azul/verdoso
Amarillo
SOR
Sorbitol
fermentación/Oxidación (4)
Azul/verdoso
Amarillo
RHA
Ramnosa
fermentación/Oxidación (4)
Azul/verdoso
Amarillo
SAC
Sacarosa
fermentación/Oxidación (4)
Azul/verdoso
Amarillo
MEL
Melibiosa
fermentación/Oxidación (4)
Azul/verdoso
Amarillo
AMYAmigdalina
fermentación/Oxidación (4)
Azul/verdoso
Amarillo
ARA
Arabinosa
fermentación/Oxidación (4)
Azul/verdoso
Amarillo
*) Requiere la adición de reactivos
1) Un amarillo muy pálido debe considerarse positivo
2) Un color naranja pálido después de 24 horas de incubación podría considerarse negativo
3) La lectura debe hacerse en la cúpula (aerobiosis)
4) La fermentación comienza en laparte inferior de los tubos, la oxidación en la superior


Materiales y reactivos:

Galería de identificación API20E
P-200 y puntas estériles
Pipetas de 5 ml estériles
Tubo 5 ml estéril
Solución salina estéril (Cloruro sódico 0.9%)
Aceite de parafina estéril
Reactivo TDA Cloruro férrico 3.4 g
Agua 100 ml
Reactivo IND Paradimetil-amino-benzaldehido 5 g
Alcohol isoamílico75 ml
HCl 37 % 25 ml

Reactivo VP1 KOH 40 g
Agua 100 ml

Reactivo VP2 1 naftol 6 g
Etanol 100 ml

Procedimiento:

1) Preparar una cámara de incubación con su tapa correspondiente y repartir 5 ml de agua en los alveolos para proporcionar un atmósfera húmeda. Anotar el número de pareja en el lateral de la galería.

2) Colocar la galería en la cámarade incubación.

3) Disponer 5 ml de solución salina estéril en el tubo. Tomar mediante el asa de siembra una colonia aislada y homogeneizar la suspensión con el agitador.

4) Inoculación de la galería (ver el esquema)
- Llenar los tubos pero no las cúpulas ( A) de los tests salvo los indicados abajo.
- Llenar el tubo y la cúpula (B) de los test (CIT), (VP) y (GEL) con la suspensión...