Aplicación del método de kjeldahl. para la cuantificación de proteínas.

Práctica I. Aplicación del Método de Kjeldahl. Para la cuantificación de proteínas.

Introducción.
Un aminoácido, como su nombre indica, es una molécula orgánica con un grupo amino (-N3H) y un grupo carboxilo (-COOH; ácido). Los aminoácidos más frecuentes y de mayor interés son aquellos que forman parte de las proteínas. Todos los aminoácidos componentes de las proteínas son alfa-aminoácidos,lo que indica que el grupo amino está unido al carbono alfa, es decir, al carbono contiguo al grupo carboxilo. Son pues, y en un muy elemental símil, los "ladrillos" con los cuales el organismo reconstituye permanentemente sus proteínas específicas consumidas por la sola acción de vivir.
Proteínas que son los compuestos nitrogenados más abundantes del organismo, a la vez que fundamento mismo dela vida. En efecto, debido a la gran variedad de proteínas existentes y como consecuencia de su estructura, las proteínas cumplen funciones sumamente diversas, participando en todos los procesos biológicos y constituyendo estructuras fundamentales en los seres vivos. De este modo, actúan acelerando reacciones químicas que de otro modo no podrían producirse en los tiempos necesarios para la vida(enzimas), transportando sustancias (como la hemoglobina de la sangre, que transporta oxígeno a los tejidos), cumpliendo funciones estructurales (como la queratina del pelo), sirviendo como reserva (albúmina de huevo), etc.
La leche se compone principalmente de agua en un 80%, proteínas, lactosa, enzimas, grasas, vitaminas, minerales y sales minerales.
*Las proteínas son: caseína, globulina yalbúmina.
*La lactosa que es un azúcar compuesto de glucosa y galactosa.
*Las enzimas son: fosfatasa, catalasa, xantinoxidasa, reductasa, peroxidasa y lipasa.
*Las grasas son muy variables dependiendo el tipo de leche que se consuma como veremos mas adelante.
*Entre las vitaminas que encontramos en la leche están: vitamina A, vitamina D, vitamina B1 y vitamina B2.
*Los minerales son: calcio, sodio,potasio, magnesio y hierro.
*Las sales minerales son: nitratos, sulfatos, carbonatos y fosfatos.
El sabor dulce de la leche proviene de la lactosa y su aroma proviene de la grasa. Su color proviene de la grasa y de la caseína. La leche se puede descomponer fácilmente por los microorganismos que contiene en su forma natural pero la tecnología y la bacteriología la han hecho mucho más estable einocua.

Determinación de proteínas por Kjeldahl.

Este método se basa en la descomposición de los compuestos de nitrógeno orgánico por ebullición con ácido sulfúrico. El hidrógeno y el carbón de la materia orgánica se oxidan para formar agua y bióxido de carbono. El ácido sulfúrico se transforma en sulfato, el cual reduce el material nitrogenado a sulfato de amonio. El amoniaco se liberadespués de la adición de hidróxido de sodio y se destila recibiéndose en una solución al 2% de ácido bórico. Se titula el nitrógeno amoniacal con una solución valorada de ácido, cuya normalidad depende de la cantidad de nitrógeno que contenga la muestra. En este método se usa el sulfato de cobre como catalizador y el sulfato de potasio para aumentar la temperatura de la mezcla y acelerar la digestión.Cuando la determinación se hace por este método también se incluye un 5% de nitrógeno no proteínico, proveniente de compuestos como aminoácidos, amoniaco, adenina, guanina, ácidos orótico, hipúrico y úrico, urea, creatina, creatinina y otros.

Materiales y Métodos.

-Matraz Kjeldahl de 800ml
-Matraz Erlenmeyer de 500ml
-Bureta de 50ml
-Pipeta de 25ml;1ml;10ml
-Piseta
-Vaso de precipitadode 50ml
-Espatula
-Pinzas con nuez
-Perilla
-Tips
-Probeta
-20 Perlas de ebullición
-3 Soporte universal
-3 Refrigerantes rectos
-6Mangueras de hule
-2Mantilla de calentamiento para matraz de fondo redondo

* Preparación de la muestra
Medir con una pipeta 10ml de la muestra de leche y colocarlos en un matraz Kjeldahl.

*Digestión
Agregar 10gr de mezcla selénica, 25ml de ácido...