Apunts De Cultius Celulars

I
Part I: Introducció als cultius cel·lulars T1: Conceptes bàsics del cultiu cel·lular Els cultius cel·lulars s’havien considerat un art a causa de la dificultat d’obtenir línies pures. Els principals problemes eren la falta de condicions d’asèpsia (no es disposava d’antibiòtics, de cabines de seguretat, etc) i la inexistència de medis nutritius, que dificultaven el cultiu de línies ambnecessitats molt específiques. Cultiu cel·lular: conjunt de tècniques que permeten el manteniment de les cèl·lules in vitro, reproduint les condicions existents in vivo (propietats biològiques, fisiològiques, bioquímiques i genètiques). Aconseguir-ho no sempre és possible, algunes cèl·lules poden canviar de morfologia, genètica o funcionalitat, com és el cas de les cèl·lules hepàtiques que no acumulenglucosa en condicions in vitro Aplicacions dels cultius cel·lulars

. Avantatges i inconvenients de les tècniques de cultius cel·lulars Avantatges ▪ Control precís i fi del medi ambient: factors fisico químics del medi i factors fisiològics ▪ Estalvi econòmic enfront de l’experimentació d’animals: ús [ ] reduïdes i d’acció cel·lular directa. ▪ Caracterització i homogeneïtat de la mostra; morfologiai composició uniformes. ▪ Ètica: experimentació amb animals restringida Inconvenients ▪ Tècnica sensible: difícil mantenir condicions asèptiques, creixement lent, necessitats nutricionals complexes i de personal qualificat. ▪ Quantitat i alt cost de producció ▪ Inestabilitat per diferències genètiques en el subcultiu: algunes cèl·lules poden patir detemrinades mutacions i proliferar abans que laresta de cèl·lules fins arribar a un punt que totes les cèl·lules tindran aquesta mutació. ▪ Validació del model in vitro: no es pot garantir el manteniment de les cèl·lules a acusa de la pèrdua d’organització tridimensional pròpia del teixit, pèrdua d’interaccions heterotípiques (entre cèl·lules

II
diferents), falta de regulació metabòlica via sistema nerviós i endocrí (es disposa de[hormones] determinada que s’anirà administrant però durant el decaïment pot afectar la cèl·lula), desdiferenciació cel·lular derivada de l’establiment del cultiu in vitro. Tipus de cultius de teixits

Òrgans: - Manté estructura 3D - - Tipus cel·lulars diferenciats. - Impossibilitat de propagació cel·lular Explants primaris - Proliferació a la perifèria de l’explant Cultiu cel·lulars - Disgregacicióenzimàtica o mecànica - Permet la propagació cel·lular - Pèrdua de la heterogeneïtat inicial Biologia cel·lular de la cèl·lula en cultiu. Selecció del cultiu Establiment del cultiu: procés de disgregació, adhesió a substrat, proliferació en monocapa o suspensió. Creixement en monocapa: cal assegurar l’adhesió (determinada per proteïnes de la MP) i la proliferació. Creixement en suspensió:proliferació sense adhesió. Ús en cèl·lules hematopoètiques, cèl·lules tumorals, algunes cèl·lules transformades genèticament i cèl·lules mare. Creixement en cultiu: selecció segons la taxa de proliferació i confluència vs. Neoplàsia.

-

III
Confluència: % de superfície ocupada per cèl·lules. S’ha d’intentar evitar el 100% ja que es produirà inhibició per contacte i s’inhibeix el cicle cel·lular dela cèl·lula. EL nivell adequat és 60-70%. Neoplàsia: creixement descontrolat de les cèl·lules. Ocupen tota la placa i fan més d’una capa.

T2: Laboratori de cultius cel·lulars Tipus de laboratori de cultius cel·lulars: condicionats per característiques cel·lulars i pel grau de seguretat que s’ha de garantir per l’aplicació de les cèl·lules. Nivell de correlació: - 1: no malaltia en adult sa - 2:patogènesi en l’home - 3: potencial de transmissió per aerosol - 4: alt risc de malaltia També s’han de definir les instal·lacions, els equips de seguretat, les pràctiques especials i les bones pràctiques de laboratori. El primer focus de control és la pressió de l’aire, tenint en compte si han de ser instal·lacions de pressió negativa o positiva. Instal·lacions d’un laboratori de Cultius...