ARN aislamiento

Conclusión
El proceso de aislamiento de ARN no difiere en gran medida del aislamiento del ADN, sin embargo el problema radica en que la muestra presente contaminación con ribonucleasas las cualesson enzimas muy estables y cuya función es degradar el ARN. Por lo cual en la práctica se añadió inmediatamente Trizol a las células de riñón. El Trizol es un compuesto formado por fenol, tiocianato deguanidina, tiocianato de amonio, glicerol y hidroxiquinoleina el cual cumple la función de mantener los ácidos nucleicos durante la homogenización del tejido, mediante la inhibición de las ARNasas ypor medio del tiocinato de guanidina lisa las células trayendo consigo la liberación de sus componentes celulares.
El empleo en la práctica de cloroformo (solvente orgánico) se debió a que el ARN seencuentra asociado a proteínas y lípidos por lo cual al añadir este solvente, se consiguió eliminar las proteínas debido a su desnaturalización y disolver a los lípidos de la muestra, aumentado laseparación de fases. La imagen 1 muestra la solución formada al agregar el cloroformo observándose la formación de dos fases.

Imagen 1. Muestra la disolución observa al momento de agregar a lamuestra el cloroformo.
El centrifugar la muestra a 14000 rpm durante 10 minutos, favoreció la separación de fases pudiendo distinguir claramente dos fases separadas por una interfase compuesta deproteínas. La imagen 2 muestra la muestra una vez centrifugada.


Imagen 2. Muestra la composición de las fases observadas.
Debido a que se pretende aislar el ARN de la muestra, se tomó en la práctica lafase acuosa una vez centrifugado el tubo eppendorf. Posteriormente ya extraído el ARN se añadió isopropanol, debido a que tiene la función de concentrar el ARN ya que provoca un cambio estructural delARN trayendo consigo la agregación y precipitación del ARN. En la imagen 3 se muestra el ARN concentrado obtenido una vez añadido el isopropanol.

Imagen 3. Muestra el ARN concentrado obtenido...