Arsenic

oInicialmente se realizó una serie de muestreos
sistemáticos y representativos durante un año para
evaluar los niveles medios de concentración de
arsénico en aguas recolectadas en los diferentes
pozos municipales de la población de Zimapán
(estado de Hidalgo, México) así como en el
distribuidor general de abastecimiento de agua a la
población. El agua utilizada para analizar los
dañosgenotóxicos fue colectada directamente del
distribuidor general. Así mismo, se colectó y
evaluó el agua en el municipio de Pachuca (sin
presencia de arsénico) la cual se utilizó como
muestra control.
La determinación de arsénico en las muestras
de agua se realizó mediante absorción atómica por
generación de hidruros, según metodología
señalada en Prieto et al. (2005).
El efecto genotóxicodel arsénico fue evaluado
en las raíces de haba (Vicia faba), variedad Minor,
considerando este cultivo como un sistema de
bioensayo para analizar la aparición de
aberraciones cromosómicas que ocurren a
través de la formación de micronúcleos. Las raíces
se expusieron al agua de Zimapán (con alto
contenido de As) y a los lotes de control con agua
del municipio de Pachuca (sin presencia deAs).
Se seleccionaron 20 semillas grandes y de
tamaño similar de haba y se sumergieron en agua
corriente durante 24 horas con el objeto de
reblandecer la testa. Luego fueron colocadas entre
dos capas de algodón en una bandeja de aluminio
sin luz, protegidas de contaminantes (polvo) y lo
suficientemente húmedas para favorecer su
germinación hasta que aparecieron las radículas.
Posteriormentese eliminó la testa para evitar la
contaminación por hongos. Cuando las raíces
alcanzaron de 4 a 5 cm de longitud (entre 2 y 3
días) se separaron en dos lotes: un lote control y
un lote problema para su tratamiento con el agua
contaminada. Se eligieron las plantas con las
raíces más grandes y se colocaron en la superficie
de un vaso de precipitado de 250 mL de
capacidad, cubierto con papelaluminio,
permitiendo que a través de un orificio las raíces
quedaran sumergidas en el agua durante 6 horas.
Una vez tratadas las raíces se procedió a la
preparación de las laminillas realizando un corte
de 2 mm del meristemo apical, el cual fue fijado
en una solución de etanol-ácido acético (3:1). Para
la tinción los meristemos apicales se colocaron en
etanol 70 % para deshidatar lacélula de la raíz. Se
agregó HCl 5M a los meristemos apicales
(hidrólisis) para eliminar la pared celular y
facilitar la entrada del colorante. El exceso de HCl
fue eliminado mediante lavado con agua destilada.
La tinción se realizó con aceto-orceína por 40
minutos, colorante de tipo básico, que tiene
más afinidad por las estructuras celulares de
carácter ácido como son los cromosomas. Seutilizó ácido acético al 45 % para eliminar el
exceso de colorante.
Los meristemos fueron colocados sobre un
portaobjetos y se maceraron para obtener la
consistencia requerida para hacer las
observaciones microscópicas a través de la técnica
denominada squash, la cual permite que las
células no estén unas sobre otras y lo más
dispersas posible lo que permite que sean
fácilmente observadas anivel microscópico.
Durante la hidrólisis, el tejido se colocó en un
portaobjetos, se maceró con una navaja de un sólo
filo y luego de la tinción se colocó un
cubreobjetos para realizar el aplastamiento en
monocapa o squash.
En campos al azar, a nivel de microscopio, se
observaron 1000 células en interfase, tanto en el
lote control como en el lote problema, para
determinar la incidencia demicronúcleos, los
cuales permiten mostrar el daño genotóxico
inducido a través de los rompimientos
cromosómicos y cromosomas con el centrómero
inactivado. Las diferencias entre ambos lotes
fueron analizadas mediante una prueba de
diferencia de proporciones (Spigel, 1970).
En caso de no encontrar daño genotóxico por
micronúcleos debido a que el compuesto fuesemás tóxico que mutágeno, se...