Art04

Bioagro 23(1): 27-34. 2011

MÉTODO MODIFICADO DE OBTENCIÓN DE ADN
GENÓMICO EN ORQUÍDEAS (Cattleya spp.) PARA
AMPLIFICACIÓN CON MARCADORES MOLECULARES
Iris Pérez-Almeida1, Luis Angulo Graterol1, Gustavo Osorio1, Catalina Ramis2, Ángela María
Bedoya2, Rosana Figueroa-Ruiz3, Sandy Molina4 y Diógenes Infante4
RESUMEN
Dado que la eficacia de los distintos protocolos existentes para aislar ADN encantidad y calidad suficiente puede diferir según el
cultivo, es necesario estandarizar los métodos de extracción para garantizar su sencillez y efectividad. En este trabajo se propone
una modificación al método de Risterucci et al. (2000) el cual fue comparado con otros protocolos para la extracción de ADN de
hojas de Cattleya spp. con el fin de seleccionar el método más apropiado a usar en elanálisis del potencial genético de estas
especies a través de marcadores moleculares como RAPD e ISTR. Con el método propuesto se obtuvo ADN similar al obtenido
utilizando un kit comercial, ya que ambas metodologías produjeron ADN en apropiada cantidad y calidad. El método ofrece
ventajas sobre otros protocolos, principalmente debido al reducido número de pasos para la obtención del ADN, facilidad deejecución y, en especial, su alta estabilidad, lo cual le favorece en aquellos casos en que se requiera procesar muchas muestras
simultáneamente, minimizando las posibilidades de contaminación accidental.
Palabras clave adicionales: Diversidad genética, ISTR, RAPD

ABSTRACT
Modified method to obtain genomic DNA from orchids (Cattleya spp.) for amplification with molecular markers
Since theeffectiveness of the different protocols for isolating DNA in sufficient quantity and quality may vary depending on the
crop, it is necessary to standardize the extraction methods to ensure its simplicity and effectiveness. In this paper we propose a
modification to the method of Risterucci et al. (2000), which was compared with other protocols to extract DNA from leaves of
Cattleya spp. to select the mostappropriate method to use for analyzing the genetic potential of the species through molecular
markers such as RAPD and ISTR. With the proposed method the obtained DNA was similar to that extracted using a commercial
kit, since both methods produced DNA in appropriate quantity and quality. The method offers advantages over other protocols,
mainly because the low number of steps for obtaining DNA,ease of implementation and especially, high stability, which is
favorable in cases where it is required to process many samples, reducing the possibility of accidental contamination.
Additional key words: Genetic diversity, ISTR, RAPD

dificulta el trabajo de identificación y descripción
de las mismas, para lo cual es importante contar
con herramientas más precisas que permitan
establecer concerteza una jerarquía de categorías
donde pueda registrarse fácilmente la información
de las especies, considerando a la especie como la
única unidad tangible en la naturaleza que tiene la
capacidad para mutar y por ende a evolucionar
(Dunsterville y Garay, 1966).
El uso de marcadores moleculares permite
estudiar y analizar el potencial genético de una

INTRODUCCIÓN
El género Cattleya tiene unadistribución
neotropical que abarca desde México, América
Central, Brasil, Venezuela, hasta Perú (Foldats,
1970). Venezuela, Colombia y Brasil se han
caracterizado por poseer el mayor número de
orquídeas silvestres (Yanes, 1959). Existe una
gran diversidad dentro de las orquídeas a nivel
tanto reproductivo como vegetativo, además de su
variación en tamaño y color. Tal situación

Recibido: Mayo 17, 2010Aceptado: Diciembre 17, 2010
1
Instituto Nacional de Investigaciones Agrícolas, CENIAP. Apdo. 4653. Maracay. Venezuela. email: iperez@inia.gob.ve
2
Centro Investigaciones Biotecnología Agrícola, Facultad de Agronomía, UCV. Apdo. 4579. Maracay. Venezuela.
3
Facultad de Agronomía, Universidad Central de Venezuela. Maracay. Venezuela.
4
Centro Nacional de Biotecnología Agrícola, Fundación Instituto...