art07

Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología 2008; 28:31-37

Artículo original
Extracción y purificación de glucosa oxidasa para fines diagnósticos
producida en medios a base de fertilizantes y azúcar industrial
Normig Zoghbia, Luis Ojedaa, Nirza Noguerab, Antonio Yépezc,
Hendricka Camargoc, Francisco Triana-Alonsoc*
a

Departamento de Fisiología y Bioquímica, Escuela de MedicinaDepartamento de Física Química y Matemáticas, Escuela de Bioanálisis
Universidad de Carabobo - Sede Aragua
c
Instituto de Investigaciones Biomédicas, Universidad de Carabobo (BIOMED-UC)
Venezuela
b

Recibido 28 de noviembre de 2007; aceptado 05 de febrero de 2008

______________________________________________________________________________________________________________
Resumen La enzima glucosa oxidasa(GOX) es componente esencial de reactivos para determinación de glicemia y otros parámetros
paraclínicos. Para su producción suele utilizarse Aspergillus niger cultivado en medios con sustratos costosos de grado analítico. Por
tanto, se planteó purificar GOX producida por A. niger, cultivado con nutrientes complejos y económicos, y evaluar su efectividad en
mediciones de concentración de glucosa.Para ello se formularon 4 tipos de medio, uno estándar y tres alternativos con azúcar industrial y
fertilizantes. Los cultivos se realizaron en fiolas con 50 mL de medio bajo un diseño de bloques al azar, evaluando el crecimiento y la
actividad enzimática. El medio alternativo con mejor rendimiento fue seleccionado para producción en biorreactores de 5 L y posterior
purificación de GOX(fraccionamiento salino y cromatografías en Sephadex G-25 y DEAE-Sephacel). Se obtuvieron altos rendimientos
de enzima (7 mg por carga) de alta pureza (39000 U/g) y un KM aparente para glucosa de 22 ± 1 mM. El reactivo de diagnóstico formulado presentó un intervalo de linealidad óptima (de 50 a 600 mg/dL de glucosa). Por lo que se concluyó que los sustratos en el medio de
cultivo alternativo no interfierenen la calidad y cantidad del producto purificado.
Palabras Claves: Glucosa oxidasa, diagnóstico, glicemia, Aspergillus niger

Extraction and purification of glucose oxidase for diagnostic purposes
produced in media based on fertilizers and industrial sugar
Abstract The enzyme glucose oxidase (GOX) is an essential component of reagents used for determining blood sugar and other clinical
parameters.Aspergillus niger grown in media prepared with expensive analytical grade substrates is used for its production. Therefore,
we decided to purify GOX produced by A. niger grown in media with complex and inexpensive nutrients and to evaluate its efficiency in
glucose concentration measurement assays. For this purpose we formulated four types of media, one standard and other three alternatives
inwhich we used industrial sugar and fertilizers. The cultures were done in 50 mL flasks under a random block design, evaluating growth
and enzymatic activity. The alternative medium with the best yield was selected for production in 5 liter bioreactors and later GOX purification (saline fractioning and Sephadex G-25 and DEAE-Sephacel chromatography ). Two large enzyme yields were obtained (7 mg perload), highly purified (39000 U/g), and with an apparent 22 ± 1 mM glucose KM. The diagnostic reagent formulated presented an optimal
linearity interval (between 50 and 60 mg/dL glucose). Therefore, it was concluded that the substrates in the alternative culture medium
did not interfere in the quality and quantity of the purified product.
Key words: glucose oxidase, diagnosis, glycemia, Aspergillusniger
______________________________________________________________________________________________________________
* Correspondencia:
E-mail: biomed@uc.edu.ve

Introducción
La glucosa oxidasa (E.C.1.1.3.4) es una glicoproteína
dependiente de FAD, que cataliza la oxidación de la β-D-

glucosa, por la vía del D-glucano-δ-lactona, hacia ácido
glucónico y peróxido de hidrógeno, usando el oxígeno...