ARTICULO 2


S.Ariza y C. Ramirez

Resumen
Este documento recopila el proceso de aislamiento de un organismo proteolítico que según resultados   en pruebas en el laboratorio posiblemente sea de la familia Enterobacteriaceae, se inicia con un inoculo tomado de un lixiviado de carne que es sembrado en agar nutritivo, un medio de cultivo que proporciona los macro y micro nutrientes necesarios para elcrecimiento de las células como unidades formadoras de colonias (Parker, 2004) después de el proceso de incubación se toma de nuevo un inoculo a partir de una colonia aislada, empleando varios procesos con medios selectivos y diferenciales, pruebas bioquímicas, tinciones, observación del organismo en microscopio óptico se establece que es un organismo G ram negativo, cuya morfología es de bacilo,motilidad positiva , con actividad proteolítica de acuerdo a resultados en medios selectivos como el agar yema de huevo y pruebas con reactivos como el biuret.

Palabras claves: Proteolitico, enterobacteria, agar, inoculo, bacilo.
Introducción
Mediante este proyecto se pretendió aislar un organismo de actividad proteolítica pues el lixiviado de la carne es generado por actividad de microorganismosdegradadores de proteínas (A.amiglietti, 2005). Se presentaron dificultades en el proceso de cultivo pues se hallaron diferentes variedades de microorganismos, y el objetivo es aislar un solo organismo degradador de proteínas y reconocer su actividad enzimática con reactivos y medios de cultivo. Este proceso de aislamiento inicia tomando el inoculo del lixiviado, cultivándolo en agarnutritivo por 48 horas cuyos componentes son necesarios para los microorganismos, con macro y micro nutrientes (Parker, 2004) con el método de siembra en estría, los organismos forman colonias que se inmovilizan en el medio sólido para tener colonias aisladas, con las cuales, se hizo una observación en microscopio óptico empleando la tinción de Gram cuyo resultado fue, bacilos Gram negativos concoloración rojiza y diplococos gran positivos con coloración morada (Parker, 2004) se hace un cultivo en el medio agar yema de huevo del cual se obtuvieron resultados importantes como halo de hidrólisis alrededor de la colonia (B.Rodas, 2009) con ello reconocimiento de la actividad proteolítica indicador de actividad enzimática que degrada las proteínas por medio de un proceso llamado proteólisis quees una ataque al enlace peptidico de las proteínas con enzimas llamadas proteasas. se hace transferencia de un inoculo más puro para lograr con mayor rigor aislar el organismo (Royer Y.Stanier, 1996) , empleando medios de cultivo selectivos y diferenciales se toma una colonia aislada y se siembra de nuevo en agares EMB, EMB, BP, BC y con ellos un resultado importante en particular en el medioEMB donde se encuentran colonias de color negro y con brillo metálico resultado que sugiere la posibilidad de tener un organismo enterobacter (A.amiglietti, 2005) para finalizar y comprobar la actividad proteolítica, se realiza una siembra en caldo con sales mínimas (glucosa 0,1% y gelatina 0,1%) para observar la actividad enzimática en tres tubos control, problema y blanco y agregando biuret acada uno para ver la actividad de las enzimas.

Metodología
En el primer inoculo de la posible cepa proteolítica se toma una muestra de lixiviado de carne adicionada a una mezcla de proteínas esenciales preparada en el laboratorio sembrada en agar nutritivo y PDA luego se lleva a incubación a 25°c grados, (para todas la incubaciones en adelante se llevan a temperatura de 25°c excepto la pruebaspara identificar si el organismo era termófilo o psicrófilo ) Después de hacer una descripción morfológica y tinción de Gram, se da paso a la primera prueba selectiva para demostrar el metabolismo de la bacteria; se realiza una siembra en agar yema de huevo y agar almidón llevada a incubación, por 48 horas. El resultado es tomado para hacer siembras selectivas y diferenciales en agar EMB, BP,...