articulo 4 1

Evaluación de la eficacia de un extracto alergénico de soya para el diagnóstico de hipersensibilidad inmediata


Las leguminosas son una fuente barata de proteínas que se cultivan prácticamente en todo el mundo y constituyen la base de la alimentación en muchos países en vías de desarrollo. Particularmente el cultivo de soya ha crecido exponencialmente, impulsado principalmente por su elevadacalidad nutricional. Debido al incremento en el consumo de esta leguminosa, la población mundial está cada vez más expuesta a los antígenos presentes en la cáscara de esta leguminosa, propiciando con ello la aparición de síntomas en personas atópicas y la sensibilización. En la actualidad las alergias alimentarias son casi tan comunes como la respiratorias, alcanzando una prevalencia en niños del 8%y en adultos del 3%. No se ha establecido la incidencia de la alergia a la soya en adultos, sin embargo año con año el número de pacientes incrementa. Esto se encuentra asociado al aumento en el consumo del producto mismo, además de la aparición de productos derivados de esta leguminosa. Es posible determinar una alergia alimentaria con una prueba de provocación a doble ciego sin embargo laprueba cutánea de punción es una herramienta importante en el diagnóstico. Para ello es necesario contar con extractos de alérgenos de alimentos estandarizados, sin embargo estos son extremadamente costosos, mientras que los no estandarizados pueden originar una gran variabilidad en los resultados. El propósito de este trabajo es la obtención de extractos alergénicos eficaces, seguros y no costososcontribuyendo al diagnóstico de la alergia a la soya.
Este trabajo constó de dos grupos individuos; el grupo A estaba constituido de pacientes con una alergia a la soya confirmada (30 individuos) mientras que el grupo B eran controles de un banco de sangre. Las edades eran de entre 15-55 años y había personas de ambos sexos. Se excluyeron individuos con afecciones cutáneas, psicológicas,embarazadas, con contraindicación en la utilización de epinefrina y tratamiento inmunosupresor. Se tomó 100 g de harina de soya y se disolvió con 2 L de tampón fosfato salino con el fin de mantener las proteínas alergénicas disueltas en el tampón. Se recolectó el sobrenadante y se centrifugó a 4000 rpm durante 60 minutos. El sobrenadante nuevamente se filtró por un sistema de filtración. Primero el productose sometió a una concentración hasta obtener 500 mL, seguido de una filtración con solución de PBS y se concentró hasta 250 mL. Se mantuvieron las condiciones asépticas con un sistema de filtración específico. El material estéril concentrado constituye el ingrediente farmacéutico activo. El producto destinado a pruebas cutáneas se le agrego glicerol a una concentración final del 50%.
Para laestandarización del producto se utilizaron métodos analíticos como:
Determinación del contenido de proteínas mediante el método de Lowry: en cada placa se colocaron 100 μL de las muestras diluidas más 200 μL del reactivo para la prueba. Se incubo durante 10 minutos, se añadieron 20 μL del reactivo de Folin y se incubo por 30 minutos. Se determina la intensidad de la coloración de la reacción en unlector de placas a 620nm
Composición de proteínas: la composición de proteínas se determinó mediante una electroforesis. Se uso una minicámara y un patrón de proteínas de entre 14-94 kDa.
Perfil inmunológico: inmunoblotina IgE: las proteínas de la electroforesis anterior fueron depositadas en una membrana de nitrocelulosa durante 2 horas. Se realizó el bloqueo de los sitios inespecíficos de lamembrana. Luego la membrana se incubó con los sueros a una dilución 1:10 y se lavó múltiples veces. Se empleo un anticuerpo monoclonal anti-IgE conjugada con fosfatasa alcalina, se dejó incubar y finalmente se hizo la revelación con un sustrato colorimétrico.
Actividad alergénica: mediante ELISA e inhibición de IgE
Se realizó la selección de sueros de pacientes para métodos basados en IgE

Método...