articulo molecular

Desarrollo y Evaluación de una PCR doble de un solo paso para la detección simultánea de Fasciola hepatica y Fasciola gigantica (Familia Fasciolidae, Clase Trematoda, Platyhelminthes Filo)
ABSTRACTO
Una PCR múltiple de un solo paso (aquí referido como una PCR dúplex) ha sido desarrollado para la detección simultánea y diagnóstico de Fasciola hepatica y F. gigantica. Estas especies sesuperponen en la distribución en muchos países del norte y el este de África Central y el sudeste de Asia y son similares en la morfología del huevo, por lo que la identificación de las muestras fecales es difícil. Basado en una alineación comparativa de ADN mitocondrial (ADNmt) que abarca la región de cox1-trnT-rrnL , dos cebadores directos específicos de la especie fueron diseñados, FHF (por F.hepatica ) y FGF (por F. gigantica ), y un solo cebador inverso, FHGR (común para ambas especies). PCR convencional seguida de la secuenciación se aplicó usando pares de cebadores específicos de especie para verificar la especificidad de los cebadores y la identidad de Fasciola plantillas de ADN. PCR doble (usando tres cebadores) se utilizó para la prueba con el ADN extraído de gusanos adultos, miracidios,y los huevos, la producción de amplicones de 1031 pb para F. hepatica y 615 pb para F. gigantica. El duplex PCR pudo amplificar a partir de ADN de otro hepático común y trematodos intestinales, entre ellos dos, tres opisthorchiids heterophyids, un echinostomid, otra fasciolid y un cestodo ténidos. El análisis de sensibilidad mostró que el límite de detección de PCR duplex para cada especie deFasciola  osciló entre 0,012 y 0,006 ng ng de DNA. Evaluación del uso de plantillas de ADN de 32 muestras de Fasciola (28 adultos y 4 huevos) y de 25 heces recogidas en el campo de los rumiantes y los seres humanos reveló bandas específicas del tamaño correcto y la presencia de especies de Fasciola. Esta novela ADNmt duplex PCR es una herramienta sensible y rápida para la identificación precisa deespecies de Fasciola en áreas de superposición y de distribución zonal.
INTRODUCCIÓN
Dos especies de Fasciolidae (Trematoda; platelmintos), es decir, Fasciola hepatica Linnaeus 1758 (en su mayoría distribuidos en las zonas templadas) y Fasciola gigantica Cobbold 1856 (comúnmente en las regiones tropicales), son los agentes causantes de la fascioliasis parasitaria, una enfermedad cosmopolita comúnque se produce principalmente en los rumiantes domésticos, incluyendo ganado vacuno, búfalos, ovejas y cabras. En los últimos años, un creciente número de casos humanos han sido reportados cada año, sobre todo en los países tropicales en desarrollo, lo que confirma su transmisión zoonótica grave y emergente / Nuevo estado parasitario emergente. Ambas especies coexisten en algunos países del nortey el este de África, como Egipto, Etiopía, Níger, Kenia y Tanzania y en los países de Europa Central / Sudeste de Asia como Pakistán, Irán y China. Comer verduras , vegetales contaminados con meta cercarías de Fasciola crudos o mal cocidos puede conducir a la fasciolosis, con lesiones potencialmente mortales en el hígado y vías biliares
Arrojar huevos en las muestras de heces apenas se puedendistinguir entre las dos especies de Fasciola, y se confunden fácilmente con los de otros trematodos. Técnicas sensibles y precisas para el diagnóstico precoz de las enfermedades tropicales desatendidas, como la fasciolosis, se requieren con urgencia. Hasta la fecha, varias técnicas de diagnóstico para la identificación y discriminación de Fasciola spp, se han desarrollado, incluyendo la deteccióntradicional de los huevos en las heces directamente o después de la sedimentación basada Kato-Katz el examen morfológico de los adultos, el inmunoensayo de flujo lateral para serodiagnóstico y el ensayo inmunoenzimático (ELISA indirecto).
Aunque a menudo son muy sensibles, los métodos serológicos no hacen un seguimiento/ cura muy buenos y no pueden proporcionar una indicación precisa de la...