Articulo PPO Astrolabio

El#Astrolabio

6

El gen
de las sombras

Solanum betaceum
Fotografía: Laura Pulido - Área de Comunicaciones, Gimnasio Campestre.

7

ARTÍCULO

oRIGINAL

AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE
LA REGIÓN 3’
DE UN GEN QUE CODIFICA UNA POLIFENOL OXIDASA
(PPO) EN TOMATE DE ÁRBOL
(Solanum betaceum (
)
Roberto Carlos Lenis Posada 1 y Mauricio Pulido Jiménez

2

centrobiomol@campestre.edu.coRESUMEN

SUMMARY

ppo

Palabras clave:
Solanum betaceum

Key words:

8

INTRODUCCIÓN

-

Solanum betaceum
-

-

-

-

-

-

-

ppo

9

E. coli

-

-

cación de los DNAs genómicos:
-

Diseño de los iniciadores para PCR: Las
-

ppo,
-

MATERIALES Y MÉTODOS
Material vegetal:

-

Solanum betaceum
Solanum tuberosum
ppo

Cultivo de Escherichia coli
o

mico de tomate de árbol, papa y E. coli
del gen ppo detomate de árbol:

10

gen ppo

Análisis de similitud con genes y proteínas PPO previamente reportadas: La
-

-

RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Iniciadores para PCR

genes ppo

-

-

-

aislado:

-

gen ppo

-

11

-

-

en los genes ppo

ppo,
ppo
ppo
pondiente al gen ppo de tomate de árbol

genes ppo
-

Iniciador
InfPPO-F
PPO-Rv

Longitud (pb.)
20
21

Posición degenerada
nucleótidos 4, 7, 9 y 15nucleótido 11

% G-C
36,4
38,0

Tm (oC)
63,5
67,0

Tabla 1.
tomate de árbol.

ppo de

Especie

Gen

Tamaño gen
(pb.)

Lugar posicionamiento
iniciadores

Tamaño producto PCR (pb.)

Tomate

ppo-A

1893

881 - 1762

901

Tomate

ppo-B

1791

884 - 1771

908

Tomate

ppo-C

1881

869 - 1750

901

Tomate

ppo-D

1776

869 - 1756

908

Tomate

ppo-E

1764

878 - 1744

887

Tomate

ppo-F

1758

878 - 1738

881Papa

ppo-POT 32

1794

887 - 1774

908

Papa

ppo-POT 33

1800

893 - 1780

908

Papa

ppo-A

1752

866 - 1732

887

Papa

ppo-B

1767

881 - 1747

887

Tabaco

ppo

1781

886 - 1761

896

Tabla 2. Sitios de posicionamiento de los iniciadores diseñados para este estudio sobre genes ppo de diferentes especies y
tamaño de los productos de PCR que permiten generar.

12

ppo de
tomate de árbol.

--

-

o
o

Reactivo
H2O
Buffer PCR
MgCl2
dNTP’s
Iniciador SupPPO-F

Concentración inicial
5X
25 mM
2.5 mM

DNA (dil 1:10)
Taq Polimerasa

-

Volumen/Reacción
1X
4.5 mM
0.2 mM

-

Tabla 3
genómico de tomate de árbol.
1

2

3

ppo a partir de DNA

4

5

Etapa
Denaturación Inicial
950 pb.

Temperatura /
Tiempo
o
94 C X 4 min.

1000 pb.

Figura 1
correspondientes a genes ppo. Línea 1: blanco; Línea 2:genoma de E. coli
Línea 4: genoma de tomate de árbol; Línea 5: marcador de
peso molecular.

Denaturación
Anillaje
Extensión

94 oC X 1 min.
57 oC X 45 seg.
72 oC X 75 seg.
72 oC X 7 min.

Número
de ciclos
1
45

1

Tabla 4.
por PCR del fragmento de 950 pb. del gen ppo a partir de
DNA genómico de tomate de árbol.

13GCGAGACTTCACCACCATTCTTTGGTACCAGAGTCACCGCAATAGTGTTTTCATCTTCCAGGCCAATGTCCTCCAACAGTTCAGTTATCGCCAGCTGCAAAGTAGCACTCGCAACATGATCAGAATCATTAGCTTGGTGAACATGTGGCAAGCTAGTATAGCTCCCCGCGAACTCTATCATGTCAAGCTCATCCGCTTTCACGTTCTTGTCCACGTTCAGGAACACATCGAACCTTACATATTCTCTATTATCATATTTTATGTAGTTGAATGTTAGTAACTCCTCTTGTTCATTCTTCTCCTGTTGAGTCCTCGAGGAGGCCGGCCTATTGATGGAAAACGAAATGGCTTTGTCCAGCTTAAAGATTGGGAATACCTTGCTCGCTTGCAGAAGTGAACCTGTATTCACTTTCCCATCTGCTTTCTTTTTGTTTGGCTTGAAGTTACACCATGGGGTGGGCATTGGTGCGTAATCGTACCCCATCTTCTTCGTGTCCAAACAGTCTCGTACTTTCACGAGGTAAGGATTTTTGTTTTCATCGTGGAAAAAAAATTTGGAGACCAAACAGTCTTTATGTGAAAGATTCCTTCTTTTCCCTCCGATTTGTTTCAATTCATTCGAGAATAACGCGGGGGCCATAAAAAACCAGCTGCCTCATGACTGACTCTGAGGCGCGAAAAACGTGANGATCCAACGGGATTCCATACCCTGAAACTCCATGCTGTAAACTACGTGTGCTGTATGTTGGGCAACTTAGTTGTTCAATGCCACACCTCCCGCGAGTAACCACACCATCTGTAAAATACAGACGTAACGTTGAAACTCACAGAGCTGACGGGTTGCGTCTACCCTCGTAACAACCTGACACTTTCTTTCCAAGCATGCGCAGATCCTTACAAGGCCTTGTATGCCTATGCCTGTGTCCAACTAGGGCTTTTNC
Figura 2. Secuencia de nucleótidos correspondiente al fragmento del gen ppo

Especie
Tom. Árbol
Tomate
Tomate
Tomate
Tomate
Tomate
Tomate
Papa
Papa
Papa
Papa
Papa
Papa
Tabaco
Batata
Batata
Durazno
Pera
Haba
Manzana
Manzana

Gen
ppo
ppo A
ppo B
ppo C
ppo D
ppo E
ppo F
pot 32
pot 33
pSP32
ppo A
ppo B
pSRP33
ppo
ppo
ppo -1
ppo
ppo
ppo...