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Páginas: 15 (3587 palabras)
Publicado: 26 de noviembre de 2013
Revista Costarricense de Ciencias Médicas
versión ISSN 0253-2948
Rev. costarric. cienc. méd vol.18 no.1 San José jul. 1997
Evaluación de un método enzimático colorimétrico para la cuantificación de colesterol sérico
Alicia Chaves-Chavarría*, Marianela Vargas-Umaña*, Karl Schosinsky-Nevermann*, Manuel Jiménez-Díaz*
Resumen
Se evaluó un método enzimático colorimétrico para lacuantificación de colesterol sérico, basado en la reacción de Trinder. La técnica consiste en mezclar 2,0 mL de reactivo de trabajo previamente preparado, con 20 µ L de suero. La absorbancia es leída a 500 nm contra blanco de reactivos después de 15 minutos de incubación a 37º C. El intervalo analítico es de 25 a 600mg/dL.
La comparación de los resultados con el método de colesterol total en sueropor extracción dio una regresión lineal de Y = -0,4223 + 0,8907(X), con un coeficiente de correlación (r) de 0,958 y una desviación estándar sobre la línea de regresión (Sy/x) de 24 mg/dL. Con el método Colesterol Fast Color se obtuvo una regresión lineal de Y = 19,5 + 1,02 (X), un coeficiente de correlación (r) de 0,972 y una desviación estándar sobre la línea de regresión de 13 mg/dL. Con elmétodo Colestat la regresión lineal fue de Y = 25 + 1,000 (X) con un coeficiente de correlación (r) de 0,983 y una desviación estándar sobre la línea de regresión lineal de 16 µg/dL.
Las precisiones día a día para muestras con valores de colesterol bajos, normales y altos mostraron coeficientes de variación de 1,8; 1,9 y 1,5 por ciento y en un mismo día de 2,3; 3,3 y 2,4 por cientorespectivamente.
La hemoglobina y el ácido acetilsalicílico en concentraciones de 50 mg/dL no bilirrubina produce una interferencia de 0,42 por ciento.
El reactivo de trabajo almacenado en botella ámbar es estable por al menos 3 semanas a 2- 8º C. El reactivo es estable por lo menos un año si la solución concentrada de enzimas se almacena en congelación a –70º o en forma liofilizada, y por almenos dos meses a + 4º C.
Las concentraciones óptimas incluyen 1,5 mmol/L de 4-aminofenazona, 0,5 g/L de Triton X-100, 3 mmol/L de colato de sodio, 16 m mol/L de fenol, 1000 U/L de peroxidasa, 250 U/L de colesterol oxidasa y 500 U/L de colesterol esterasa. (Rev. Cost. Cienc. Med. 1997, 18-1: 30-43)
Palabras clave
Key word index: serum cholesterol, serum lipids, coronary artery disease.
Introducción
El colesterol es un esterol encontrado en todos los tejidos animales. Participa en funciones fisiológicas muy importantes como lo son la síntesis de ácidos biliares, de hormonas esteroideas y de membranas celulares. En la sangre se transporta ligado a lipoproteíans, las LDL (lipoproteínas de baja densidad) que lo transportan hacia los tejidos y las HDL (lipoproteínas de altadensidad) que lo transportan de los tejidos hacia el hígado. El colesterol sérico se asocia con aterosclerosis y riesgo aumentado de enfermedad cardiovascular. Se consideran los valores entre 200 mg-dl y 240 mg/dl como valores de alto riesgo para población adulta (1). Su cuantificación en suero es uno de los procedimientos analíticos más comunes en el laboratorio clínico (2).
Allain et al. (3)describieron en 1974, un método enzimático basado en:
El cromógeno producido tiene una absorción máxima de 500 nm. Esta última reacción que forma el complejo coloreado, conocida como la reacción de Trinder (4), es la base de la mayoría de los juegos de reactivos encontrados en el mercado (5,6). Las técnicas enzimáticas son métodos directos y pueden ser aplicados a sistemas automatizadosfácilmente.
La mayoría de estos métodos vienen ya listos para usar, en juegos de reactivos suplidos por casas comerciales y cuya técnica no es presentada en detalle.
Estas técnicas han desplazado, en la rutina, a la clásica reacción de Liebermann-Burchard, que es la más usada dentro de las reacciones no enzimáticas para la cuantificación de colesterol (7). Estos métodos son afectados por...
versión ISSN 0253-2948
Rev. costarric. cienc. méd vol.18 no.1 San José jul. 1997
Evaluación de un método enzimático colorimétrico para la cuantificación de colesterol sérico
Alicia Chaves-Chavarría*, Marianela Vargas-Umaña*, Karl Schosinsky-Nevermann*, Manuel Jiménez-Díaz*
Resumen
Se evaluó un método enzimático colorimétrico para lacuantificación de colesterol sérico, basado en la reacción de Trinder. La técnica consiste en mezclar 2,0 mL de reactivo de trabajo previamente preparado, con 20 µ L de suero. La absorbancia es leída a 500 nm contra blanco de reactivos después de 15 minutos de incubación a 37º C. El intervalo analítico es de 25 a 600mg/dL.
La comparación de los resultados con el método de colesterol total en sueropor extracción dio una regresión lineal de Y = -0,4223 + 0,8907(X), con un coeficiente de correlación (r) de 0,958 y una desviación estándar sobre la línea de regresión (Sy/x) de 24 mg/dL. Con el método Colesterol Fast Color se obtuvo una regresión lineal de Y = 19,5 + 1,02 (X), un coeficiente de correlación (r) de 0,972 y una desviación estándar sobre la línea de regresión de 13 mg/dL. Con elmétodo Colestat la regresión lineal fue de Y = 25 + 1,000 (X) con un coeficiente de correlación (r) de 0,983 y una desviación estándar sobre la línea de regresión lineal de 16 µg/dL.
Las precisiones día a día para muestras con valores de colesterol bajos, normales y altos mostraron coeficientes de variación de 1,8; 1,9 y 1,5 por ciento y en un mismo día de 2,3; 3,3 y 2,4 por cientorespectivamente.
La hemoglobina y el ácido acetilsalicílico en concentraciones de 50 mg/dL no bilirrubina produce una interferencia de 0,42 por ciento.
El reactivo de trabajo almacenado en botella ámbar es estable por al menos 3 semanas a 2- 8º C. El reactivo es estable por lo menos un año si la solución concentrada de enzimas se almacena en congelación a –70º o en forma liofilizada, y por almenos dos meses a + 4º C.
Las concentraciones óptimas incluyen 1,5 mmol/L de 4-aminofenazona, 0,5 g/L de Triton X-100, 3 mmol/L de colato de sodio, 16 m mol/L de fenol, 1000 U/L de peroxidasa, 250 U/L de colesterol oxidasa y 500 U/L de colesterol esterasa. (Rev. Cost. Cienc. Med. 1997, 18-1: 30-43)
Palabras clave
Key word index: serum cholesterol, serum lipids, coronary artery disease.
Introducción
El colesterol es un esterol encontrado en todos los tejidos animales. Participa en funciones fisiológicas muy importantes como lo son la síntesis de ácidos biliares, de hormonas esteroideas y de membranas celulares. En la sangre se transporta ligado a lipoproteíans, las LDL (lipoproteínas de baja densidad) que lo transportan hacia los tejidos y las HDL (lipoproteínas de altadensidad) que lo transportan de los tejidos hacia el hígado. El colesterol sérico se asocia con aterosclerosis y riesgo aumentado de enfermedad cardiovascular. Se consideran los valores entre 200 mg-dl y 240 mg/dl como valores de alto riesgo para población adulta (1). Su cuantificación en suero es uno de los procedimientos analíticos más comunes en el laboratorio clínico (2).
Allain et al. (3)describieron en 1974, un método enzimático basado en:
El cromógeno producido tiene una absorción máxima de 500 nm. Esta última reacción que forma el complejo coloreado, conocida como la reacción de Trinder (4), es la base de la mayoría de los juegos de reactivos encontrados en el mercado (5,6). Las técnicas enzimáticas son métodos directos y pueden ser aplicados a sistemas automatizadosfácilmente.
La mayoría de estos métodos vienen ya listos para usar, en juegos de reactivos suplidos por casas comerciales y cuya técnica no es presentada en detalle.
Estas técnicas han desplazado, en la rutina, a la clásica reacción de Liebermann-Burchard, que es la más usada dentro de las reacciones no enzimáticas para la cuantificación de colesterol (7). Estos métodos son afectados por...
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