Articulo

Simon Alba
Laura Brand Díaz- 201215708
Nickole Villabona

Abstract

Candida albicans es un hongo que es de gran importancia médica para las personas, ha sido un problema para los fármacos pues posee una habilidad de mutación que le da resistencia a algunos azoles, por ende ha sido de los más estudiados por los investigadores.








Introducción

El hongo, Candida albicans pertenece al phylumAscomycota, se reproduce de forma asexual por medio de la gemación, a su vez es una levadura dimórfica, es decir, que su crecimiento varía según la temperatura a la que está expuesta. Se afirma que este dimorfismo le permite evadir los mecanismos de defensa relacionados con la inmunidad celular del huésped. En forma de levadura,  este hongo, tiene comportamientos saprófitos, mientras que en formade hongo filamentoso, se comporta como un parasito patógeno. (Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el trabajo, 2012).

C. albicans existe generalmente en los animales de sangre tibia incluyendo humanos, suele colonizar superficies mucosas tanto oral como vaginal, igualmente también suelen afectar directamente el tracto digestivo.  Una de las muchas particularidades de este hongo, y la másrelevante para este trabajo, es la resistencia a los azoles. Donde un azol es un fármaco anti fúngico con un anillo de cinco carbones unidos a una cadena alifática con un grupo fenilo.

La actividad anti fúngica reside en la capacidad de unirse con el grupo hemo, que forma parte de muchas de las enzimas implicadas en la síntesis de ergosterol, particularmente la 14-alfa demetilasa. Ahora bien,esta unión bloqueará la síntesis de ergosterol, acumulándose esteroles 14-alfa metilo, lo que inhibe el crecimiento de la célula fúngica.  Esta resistencia está dada por mutaciones en el gen ERG 11, en levaduras, mientras que en hongos miceliales en CYP51A.  Así mismo en este gen se han encontrado que el mecanismo para la resistencia son mutaciones puntuales que producen  una enzima alterada, conun descenso en la afinidad con lo azoles. Estas mutaciones se originan a partir de distintas causas  como lo son la sobreexpresión del gen, amplificación genética, conversión genética, duplicación cromosómica o recombinación mitótica. (Cuenca-Estrella, 2010)

Así mismo, se realizaron estudios experimentales con cepas de C.albicans con el fin de obtener el gen ERG 11, para ser analizado por mediode métodos bioinformáticos para poder ver la resistencia que genera esta mutación. Por otro lado, se espera que  el gen ERG 11 contenga en su secuencia una zona de alta mutación lo cual explicaría su elevada resistencia para los azoles previamente descritos.


Materiales y métodos
El experimento se dividió principalmente en 5 procesos; extracción de ADN de Candida albicans, PCR, purificación delproducto de PCR y finalmente secuenciación y  además la parte de bioinformática.
Extracción de ADN: Para la extracción de ADN se utilizaron los siguientes materiales; Caja de Petri con Candida, solución salina, centrífuga, Buffer de lisis (Tris- HCL, pH 7.2, EDTA, SDS 3%, β‐Mercaptoetanol 1%), y proteinasa K, DNA Pre-Wash Buffer, DNA Elution Buffer, Quick- gDNA Mini Prep Zymo Research. Primero seagregó solución salina a la caja de Petri y se recolectó el material en suspensión en un eppendorf. Posteriormente, se centrifugó a 13Exp3 rpm durante 5 minutos, una vez se agotara dicho tiempo se  eliminó el sobrenadante. Seguidamente, se  procedió a agregar el Buffer de Lísis y proteinasa K y se mezcló. A continuación se incubó la mezcla a 65°C por 60 minutos y por último en cuanto a laextracción se realizó el protocolo Kit  Quick- gDNA Mini Prep Zymo Research; donde se transfirió la mezcla a una columna Zymo- Spin dentro de un tubo de colección, se centrifugo a 10g/min y se descartó el tubo de selección que fue utilizado, una vez esto se completó se adiciono DNA Pre-Wash Buffer a la columna y se centrifugo nuevamente a 10g/min. Posteriormente se añadió g-DNa Wash Buffer a la columna...