Asas

Procedimiento:
OBTENICION DE LOS ESTRRACTOS DE ENZIMA:
Prepare un extracto de hígado en la proporción 1:5 en masa volumen con buffer fosfato pH 7,4. Utilicebaño de hielo para realizar la operación.
Centrifugue a 2500 rpm durante tres minutos o filtre atreves de una gasa doble o algodón.
Guarde el sobrenadante en untubo sumergido en un baño de hielo y rotúrelo como extracto de hígado.
Tome la mitad dl extracto y páselo a un tubo y colóquelo en un baño d agua hirviendo durante 5min. Rotúrelo como extracto de hígado calentado
PREPARAR 4 TUBOS DEACUERDO EL ESQUEMA:

Incubar todos los tubos por 45 min a 37C°
Retirar los tubos del bañomaría y agregar 6 ml de alcohol etílico a cada tubo. Agitar y esperar por dos minutos.
Centrifugar y usar los sobrenadantes para la cromatografía.
CromatografiaMarcara 3 cm del borde una línea suave con un lápiz, tratando de n dañar el papel crromatografico. Marcar en esa línea 6 puntos separados por 2 cm cada uno.
Colocar encada uno 5 gotas el respectivo sobrenadante y en las 2 últimas 5 gotas de alanina y 5 de glutamato respectivamente.
Dejar secar, colocar la cromatoplaca en unamaquina cromatografía con una mezcla de metanol: cloroformo, amoniaco en la proporción de 6:4:2.
Dejar correr hasta que el nivel liquido le falte 1 cm para llegar alextremo superior de la placa. Marcar el nivel al que alcanzo el líquido con un lápiz y dejar secar
Aplicar con un spray una solución de ninhidrina al 0.1% debutanol.
Colocar a la estufa por 10 min. Marcar las manchas obtenidas.
Obtener el Rf de cada mancha mediante la formula

Analice comparativamente los resultados.