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ACTIVIDAD CATALÍTICA DE LA AMILASA SALIVAL

Santiago Bedoya Betancur, sabedoyab@unal.edu.co; Cristian Daniel Beltrán, crdbeltranmo@unal.edu.co


RESUMEN
En esta práctica de laboratorio se analizó experimentalmente los diferentes aspectos de la actividad enzimática de la amilasa. Para lo cual fue necesario utilizar diferentes factores que influyeran sobre la actividad catalítica de laenzima, tales como: temperatura, pH y concentración. Allí se logró evaluar la dependencia que puede presentar una reacción enzimática mediante la coloración de cada una de las soluciones preparadas, adicionando lugol a estas y observando la intensidad de cada una de las sustancias para así dar un porcentaje subjetivo de la intensidad de color azul (%Int) y también el porcentaje de reacción (%Rex)de acuerdo a la ecuación: %Rex=100-%Int. Cabe destacar que los porcentajes de reacción fueron comparados con un control que me definía mi intensidad de color.
Palabras claves: Lugol, amilasa, Michaelis y Menten, pH, temperatura, concentración, dilución, actividad enzimática.


1. INTRODUCCIÓN

La amilasa, denominada también sacarasa o ptialina, es un enzima hidrolasa que tiene la función decatalizar la reacción de hidrólisis de los enlaces 1-4 del componente α-Amilosa al digerir el glucógeno y el almidón para formar azúcares simples, se produce principalmente en las glándulas salivales (sobre todo en las glándulas parótidas) y en el páncreas. Tiene actividad enzimática a un pH de 7. Cuando una de estas glándulas se inflama, como en la pancreatitis, aumenta la producción de amilasa yaparece elevado su nivel en sangre (amilasemia). Fue la primera enzima en ser identificada y aislada por Anselme Payen en 1833, quien la bautizó en un principio con el nombre de "diastasa" (3).
La alfa-amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana y cataliza la degradación del almidón, que es un polisacárido de reserva vegetal. El almidón está formado por dos tipos demoléculas: la amilosa y la amilopectina, ambos polisacáridos de glucosa. La amilosa se conforma por cadenas lineales de glucosas unidas por enlaces alfa- C1-C4, mientras que la amilopectina tiene, además de estos últimos enlaces, uniones C1 con C6, formando cadenas ramificadas. La alfa-amilasa rompe uniones C1-C4, tanto en la amilasa como en la amilopectina, dejando dextrinas lineales y ramificadas(oligosacáridos) como productos (3).
Para medir la actividad enzimática de la alfa-amilasa, se puede utilizar un test colorimétrico que detecta el almidón. Para ello es necesario contar con una solución de iodo/ioduro de potasio (I2/IK), ya que el almidón en presencia de esta solución adquiere una coloración azulada característica. Esto tiene una explicación física: el iodo se coloca en el interiorde la hélice que forma la

amilosa (en las regiones hidrofóbicas), formando un complejo de color azul. Cuando la alfa-amilasa actúa, degrada la amilosa, se desintegra la hélice y por tanto en presencia de I2/IK ya no dará una coloración azul (3).
Por lo tanto, se mide la desaparición de sustrato (evidenciada por el test colorimétrico) para determinar la actividad de la enzima. Además, se puedeanalizar cómo afectan las distintas condiciones en que actúa la enzima (pH, temperatura, concentración de NaCl), así como los efectos que pueden causar diferentes pretratamientos (proteinasa, calor) (3).
La dilución óptima nos indicará cuánto debemos diluir la saliva para que se logre el efecto acromático dentro del rango que es propuesto por la literatura entre (2-8 minutos) (3).
En este mismomarco los objetivos principales son la experimentación sobre diferentes aspectos de la actividad enzimática. Comprendiendo la forma en cómo diversos factores influyen en la actividad catalítica de las enzimas y así evaluar la dependencia que puede presentar la reacción enzimática con respecto a la acidez del medio, a la temperatura y a la concentración de la enzima.

3. PROCEDIMIENTO

3.1...