asdf

asdfaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaTinción Gram

Fundamento
Los fundamentos se basan en la diferencia de las paredes de las células gram positivas y negativas. La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglucano, además de dos clases de ácidos teicoicos: Anclado en la carainterna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se encuentra el ácido lipoteicoico,y más en la superficie, el ácido teicoico que está anclado solamente en el peptidoglucano (también conocido como mureína)Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada,y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior (decomposición distinta a la interna) por medio de lipoproteínas. Tiene una capadelgada de peptidoglicano unida a una membrana exteriorpor lipoproteínas. Lamembrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido.Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tiñen diferencialmente debido a estasdiferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que esel material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Grampositivas lo poseen en mucha mayor proporción que las Gram negativa
ladiferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, se debe a quela membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgánicos. Pero por el contrario, las Grampositivas, al poseer una pared celular más resistente y con mayor proporciónde peptidoglicanos, no son susceptibles a la acción del solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros cerrándolos, lo queimpide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul.

Pasos
Lo primero es realizar un frotis bien fino sobre un portaobjetos de las bacterias que se quieren teñir y se fijan al calor pasando el porta por la llama de un mechero Bunsen

Las células fijadas al calor sobre un portaobjetos se tiñen, primero con una solución de cristal violeta (otroscolorantes básicos no son tan efectivos) y se lavan después para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las células, tanto las grampositivas como las gramnegativas, están teñidas de azul.

El portaobjetos se cubre entonces con una solución de yodo-yoduro potásico. El ingrediente activo es aquí el I2; el KI simplemente hace soluble el I2 en agua. El I2 entra en las células y forma uncomplejo insoluble en agua con el cristal violeta. De nuevo tanto las células grampositivas como las gramnegativas se encuentran en la misma situación.

Se lleva a cabo después la decoloración, usando una mezcla de alcohol-acetona, sustancias en las que es soluble el complejo I2-cristal violeta. Algunos organismos (grampositivos) no se decoloran, mientras que otros (gramnegativos) lo hacen. Ladiferencia esencial entre esos dos tipos de células está por tanto en su resistencia a la decoloración; esta resistencia se debe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un solvente lipídico y disuelve la membrana exterior de la pared de la célula (y también puede dañar la membrana citoplásmica a la que se une peptidoglicano). La delgada capade peptidoglicano es incapaz de retener el de complejo cristal violeta-yodo y la célula se decolora. Las células grampositivas, a causa de sus paredes celulares más espesas (tienen más peptidoglicano y menos lípido), no son permeables al disolvente ya que éste deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo así el espacio entre las moléculas y provocando que el de complejo cristalvioleta-yodo quede atrapado dentro de la pared celular. Después de la decoloración las células grampositivas son todavía azules, pero las gramnegativas son incoloras.
Para poner de manifiesto las células gramnegativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina básica. Después de la coloración de contraste las células...