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QUIM 284 Instrumentación
“Cromatografía Líquida”

Prof. Claudio Bravo L.

La Cromatografía líquida de alta eficiencia o High
performance
liquid
chromatography
(HPLC),
antiguamente se lallamaba Cromatografía líquida
de alta presión o High pressure liquid
chromatography (HPLC).
¿Qué es?
Es una técnica utilizada para separar los componentes
de una mezcla líquida basándose endiferentes tipos
de interacciones químicas entre las substancias
analizadas y la columna cromatográfica.

Tipos de cromatografía Líquida
Cromatografía de exclusión molecular
Cromatografía deintercambio iónico
Cromatografía de partición ( Fase normal y
Reversa)
Cromatografía en papel y placa fina

Fase
reversa

Fase
normal

Cromatografía de Partición
Fase Normal

Fase Reversa
FaseEstacionaria Apolar

Fase Estacionaria Polar

Fase Móvil Polar

Fase Móvil Apolar
Orden de
elusión de
compuestos

Polares primero

Apolares primero

Detector

Columna

InterfaceRegistrador

Inyector

Bomba
Fase Móvil

Equipo HPLC tipo

Fase Móvil
La fase móvil es la fase que transporta el o los analitos por la
columna cromatografíca.
Normalmente consiste en unamezcla de solventes que cumplen
diferentes funciones tales como:
• Polaridades diferenciales
• Fuerza iónica
• Control del pH (soluciones buffers)

Acetonitrilo

Criterios para la eleccióndel solvente:
•Disponible comercialmente
•Pureza y Estabilidad (En la actualidad contamos con productos de
calidad de pureza cromatográfica)
•Disolver la muestra
•Miscible con otros solventes paraformar mezclas útiles
•No degradar o disolver la fase estacionaria
•Tener baja viscosidad para reducir las caídas de presión
•Ser compatible con el detector utilizado.
•Transparencia óptica(cuando se usan detectores UV)
•Filtración y Desgasificación de solventes

Gradiente de solvente

Inyector
El inyector del HPLC es la parte donde entra la muestra y
es mezclada con la fase móvil...