Atrofia hipocampal del área ca1

Hippocampal CA1 atrophy and synaptic loss during experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE
Marina O Ziehn1,2, Andrea A Avedisian2, Seema Tiwari-Woodruff2, and Rhonda R Voskuhl

Introducción
La esclerosis múltiple (MS) es una inflamación crónica, neurodegenetiva que se desarrolla entre los 20 y 40 años de vida. Se considera la respuesta autoinmune como la principal participante en lainmunopatogenia de la MS. Clásicamente se considera una enfermedad de desmielinización de la materia blanca (WM), caracterizada por lesiones consistentes focalizadas en la WM de linfocitos T y macrófagos infiltrados, desmielinización y transección axonal. Aproximadamente del 50 al 65% de los pacientes experimentan déficits cognitivos, una de las más comunes es la disfunción de memoria, cuta causa esdesconocida, pero estudios de neuroimágen sugieren que la patología hipocampal esta involucrada, específicamente la región CA1.
La encefalopatía experimental autoinmune (EAE) es el modelo animal más común utilizado para MS. Está caracterizado por la inflamación y neurodegeneración en la espina dorsal y el cerebro.

Hipótesis
El volumen de CA1 en EAE será significativamente menor que elCA1 del grupo control.

Objetivo
Describir la neurodegeneración hipocampal y el consecuente deterioro en el aprendizaje, en la EAE inducida por los péptidos de glicoproteína oligodentrocitos mielinizados (MOG) en ratones C57Bl/6.

Materiales y métodos
Se utilizaron ratones adultos machos C57B1/6 de entre 8 y 10 semanas. Adicionalmente se utilizaron ratones transgénicos caracterizados con elgenotipo PLP-EGFP.

El EAE fue inducido por una inyección subcutánea con una emulsión autoantígena purificada que contenía el péptido MOG, 35 a 55 aminoácidos y tuberculosis microbacteriana suspendida en una adyuvante de Freund completa. Los ratones fueron monitoreados diariamente, y la severidad de la enfermedad se midió usando la escala de grados de EAE. Los resultados clínicosindividuales se promediaron, produciendo un índice medio de la enfermedad clínica para cada grupo.

Por otro lado, el Test de memoria espacial Barnes Maze fue utilizado para evaluar el aprendizaje espacial normal, el cual fue adaptado para evitar demandas físicas innecesarias. Para probar la memoria espacial, los ratones fueron colocados en medio de una plataforma circular elevada de 90 cm dediámetro con 20 agujeros en la periferia, los cuáles eran idénticos en apariencia y ancho (5cm y separados por 7 cm). Sólo uno delos agujeros tenía salida, que consistía en una rampa de 12 cm con paredes oscuras de 20x30x20. Para aumentar la agorafobia natural en los ratones, se puso una lámpara de 60W por encima de la plataforma, mientras el experimento se llevaba a cabo en un cuarto oscuro. Además losratones fueron expuestos a un estímulo auditivo nocivo con el uso de un metrónomo a 120 latidos por minuto, en forma de 8 notas con silencio de corchea a 440 Hz de tono. En cada ensayo, los ratones se colocaron en una caja de inicio en la plataforma durante 20 seg, después se les daba 300 seg para completar el ensayo. Éstos terminan cuando el ratón entraba al agujero. Los errores que seconsideraron fueron que explorara en agujeros incorrectos, y se compararon entre grupos. Los ratones fuero evaluados tres veces cada día antes desde inicio del estudio (y de la inducción), y se evaluó el rendimiento por el cambio de errores de la primera a la última prueba.

Recolección de tejidos y seccionamiento. En diferentes puntos del tiempo a través de la enfermedad, se compararon losratones EAE con ratones sanos de la misma edad. Los ratones fueron profundamente anestesiados. Posteriormente, los cerebros fueron diseccionados de los cráneos y post-fijados toda una noche en una solución al 10% de formol y crioprotegidas en 30% de sucrosa. Se tomaron cortes sagitales de libre flotación de cada hemisferio, así como una sección más medial que incluía el hipocampo. Se seleccionó al...