Azospirrilium

El género Azospirillum
Jesús Caballero-Mellado

Programa de Ecología Molecular y Microbiana, Centro de Investigación sobre Fijación de Nitrógeno, UNAM, Ap. P. 565-A, Cuernavaca, Mor., México.
Historia
Aún cuando Spirillum lipoferum fue descrito en 1925 por Beijerinck, esta bacteria estuvo olvidada por varias décadas. Son las observaciones de Peña-Cabriales y Döbereiner en 1973 (50) lasque iniciarían la época moderna de esta bacteria. Estudios taxonómicos de S. lipoferum (88, 89) conducen a su reclasificación en un género nuevo, Azospirillum (166).
Actualmente son reconocidas seis especies en el género Azospirillum. Las dos primeras en ser descritas fueron A. lipoferum y A. brasilense (166), siendo éstas las mas ampliamente estudiadas. Posteriormente fueron descritas lasespecies A. amazonense (105), A. halopraeferans (141), A. irakense (85) y A. largomobile (26) siendo el nombre de esta especie corregido a A. largimobile (158). Pocos años antes ésta especie fue considerada como un sinónimo de la especie A. lipoferum (57). Recientemente, en honor de quien impulsara los estudios con este género bacteriano y descubriera otros diazótrofos, se ha propuesto la especiecandidata A. doebereinerae (70).
Pocos años después del redescubrimiento de Azospirillum y hasta alrededor de 1993, este género fue el más estudiado entre las bacterias asociadas a plantas. La capacidad de Azospirillum para estimular el crecimiento de las plantas y de aumentar el rendimiento de los cereales promovió numerosos estudios sobre la ecología, fisiología y genética de esta bacteria. En laactualidad su uso comercial comienza a extenderse en diferentes países, incluído México.
Aislamiento
El aislamiento de las bacterias del género Azospirillum resulta en lo general muy simple, ya sea a partir de suelo rizosférico o de la superficie de las raíces (rizoplano) de numerosas plantas hospederas. También se le aisla del interior de las raíces o tallos de algunas plantas. El medio de cultivousado por excelencia para el enriquecimiento de las especies de Azospirillum ha sido el NFb semigelificado "libre" de nitrógeno y con malato como fuente de carbono (52). No obstante, en este medio de cultivo son aisladas predominantemente cepas de las especies A. lipoferum y A. brasilense. El medio NFb con algunas modificaciones en su composición y pH permiten el aislamiento predominante de otrasespecies de Azospirillum (51). Estos medios son usados frecuentemente para evaluar la actividad reductora de acetileno, como indicativo de la fijación de nitrógeno. Tubos en los cuales se observa el crecimiento bacteriano en forma de sombrilla, la cual se transforma en una película blanca y densa abajo de la superficie del medio de cultivo, y vire del indicador azúl de bromotimol son consideradostentativamente como positivos para el aislamiento en cultivo puro de la bacteria.
El cultivo puro se logra en diferentes medios de laboratorio (126), siendo muy comunmente usado un medio adicionado del colorante rojo Congo (146), en el cual A. lipoferum y A. brasilense toman un color rojo escarlata que permite la diferenciación de otros géneros bacterianos. Aun cuando el medio BLCR fue diseñadopara mejorar el aislamiento de cepas de Azospirillum brasilense (20), su uso no fue aceptado por haberse demostrado que no era apropiado para el estudio de poblaciones naturales de esta bacteria (73). Posteriormente se observó que la concentración de estreptomicina usada (200 mg/litro) en el medio BLRC era inhibitoria del crecimiento de un gran número de cepas (103).
Además de los medios ymétodos descritos, tambien existen reportados algunos medios de cultivo y métodos para el crecimiento de Azospirillum en cultivo puro y en asociación con plantas, así como para su conservación (2, 126).
Identificación
El género Azospirillum pertenece a la subclase alfa de las proteobacterias (181), siendo A. lipoferum la especie tipo (166). Características útiles en la identificación rutinaria son...