Azucares

Determinación de Glúcidos

I) Métodos basados en el poder reductor
• Método de Fehling-Causse-Bonnans modificado (AOAC 1965, p. 495)
Reactivos:
- Solución F.C.B. (las drogas se disuelven en agua por separado y se mezclan en el orden indicado, completando a 1 litro con agua destilada en matraz aforado).
Tartrato de sodio y potasio 130 gr
Hidróxido de sodio110 gr
Sulfato de cobre cristalizado 24 gr
Ferrocianuro de potasio 16,8 gr
- Solución acuosa de azul de metileno al 1%
- Solución de glucosa o azúcar invertido 0,5%

1) Valoración del reactivo: En un erlenmeyer de 250 ml de capacidad se colocan exactamente 10 ml de reactivo FCB, 30 ml de agua destilada y 2 o 3 trozos de porcelana porosa y se calienta aebullición. Una vez alcanzada ésta, se comienza a agregar desde la bureta especial la solución patrón de azúcar a una velocidad de goteo controlada (medirla) evitando interrumpir la ebullición. Cuando la coloración azul del reactivo disminuye de intensidad o alcanza un tono celeste verdoso, se agregan 3 gotas de la solución acuosa de azul de metileno y se continúa con el agregado de solución patrón, gotaa gota, hasta decoloración. La primera gota que torna a amarillo oro parte de la solución indica el punto final. Se debe realizar esta valoración por duplicado.
Deben gastarse alrededor de 5-6 ml de la solución patrón para decolorar 10 ml de reactivo de FCB. Si el volumen gastado cae fuera de estos valores hay que modificar la velocidad de adición hasta lograr el valor indicado. La velocidadde goteo encontrada como óptima será la empleada al valorar las soluciones problema.
Nota: No hace falta agitar el erlenmeyer con las manos, la misma ebullición sirve de agitación.

2) Glúcidos solubles (directamente reductores y reductores previa hidrólisis ácida)
Pesar una cantidad de muestra de acuerdo con la cantidad de azúcares solubles, como para obtener una concentración en lasolución final de aproximadamente 0,5%, disolverla en agua destilada, agregar 5 ml de defecante (subacetato de plomo 30%), mezclar, dejar decantar y eliminar el exceso de plomo soluble por agregado de oxalato o sulfato de sodio. Completar a volumen de 100 ml con agua destilada en matraz aforado, homogeneizar por inversión (tratando de solubilizar o dispersar perfectamente la muestra) y dejar decantar 30min. Filtrar por papel y determinar en el filtrado los azúcares reductores por el método de Fehling-Causse-Bonnans o bien por el de Nelson-Somogyi.

2.1) Valoración de glúcidos solubles reductores: Se titulan 10 ml de reactivo FCB según el procedimiento seguido en a) pero esta vez cargando la bureta con la solución de azúcares solubles obtenida a partir de la muestra (filtrado). El gasto de estavaloración debe estar comprendido entre 3 y 8 ml, si no es así hay que modificar la concentración de la solución de azúcares.
Nota 1: Es conveniente que el agregado de solución de azúcares (patrón y problema) se haga al principio a razón de 1 gota/segundo y después del agregado de azul de metileno, a 1 gota/3 segundos.
Nota 2: Se debe tener sumo cuidado en la observación del punto final de latitulación, pues la coloración amarilla cambia rápidamente a parda.

2.2) Glúcidos solubles reductores previa hidrólisis ácida: En vaso de precipitado de capacidad conveniente, se colocan 50 ml del filtrado preparado para determinar glúcidos directamente reductores (punto b), se agregan 1-2 ml de HCl puro ((:1,19), se lleva a baño María por espacio de 2 horas, se neutraliza con solución de NaOH ocon NaHCO3 sólido y se lleva al volumen inicial (50 ml) con agua destilada. Filtrar y en el líquido filtrado valorar los azúcares reductores mediante la técnica descripta en b).
Cálculo: Los glúcidos directamente reductores se expresan comúnmente en porcentaje de glucosa y los no reductores (calculados a partir de la diferencia c-b) son expresados en porcentaje del disacárido mayoritario,...