Bacterias Gram Positivo y Gram Negativo

Bacterias Gram positivo y Gram negativo

¿Cómo se realiza el proceso de tinción?

Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 minuto. Todas las células Grampositivas se tiñen de color azul-púrpura.
Enjuagar con agua.
Agregar lugol y esperar entre 1 minuto. En microbiología se emplea en la tinción de Gram para retener el colorante cristal violeta. El I2 entraen las células y forma con el colorante cristal violeta un complejo insoluble en agua.
Enjuagar con agua.
Agregar alcohol acetona y esperar 30 segundos (parte crítica de la coloración).
Enjuagar conagua.
Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar 1 minuto. Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.
Para observar al microscopio óptico esconveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.
¿Cómo funciona la tinción?
El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram positivas como Gramnegativas) a través de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales actúan de mordiente (fijar colorantes entinciones biológicas), haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con elcristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración ya que ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta (Al interactuar con la membrana decierto tipo de bacterias va a hacer que la coloración se “escape” o pierda) Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos sí lo hacen.
Para poner de manifiesto lascélulas Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células Gram...