Bacterias identificacion

MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN BACTERIANA La correcta detección e identificación de los microorganismos presentes en muestras de diversos orígenes es imprescindible para determinar el origen de las infecciones, seguir el curso de las enfermedades y decidir los tratamientos a aplicar. Todos los puntos del proceso son importantes, desde la forma de tomar y mantener las muestras hasta su manipulación enel laboratorio. Se puede decir que en el proceso de identificación de microorganismos se ponen en juego todos los conocimientos acumulados en Microbiología. La identificación de bacterias puede basarse en muchos caracteres: morfológicos, fisiológicos, bioquímicos, de tipo serológico y de patogenicidad. Morfología celular: • Forma (bacilos, cocos) y agrupamiento (diplococos, racimos, rosarios). •Tinción (Gram, ácido-alcohol resistentes) • Estructuras especiales: flagelos, endosporas Morfología de las colonias: • Forma, color, consistencia, borde, sección... Fisiología: • Aerobios, anaerobios, anaerobios facultativos • Temperatura óptima de crecimiento • Movilidad Bioquímica: • Presencia o ausencia de una enzima o de toda una ruta metabólica. • Fermentación de carbohidratos • Utilización decitratos como única fuente de carbono Técnicas Moleculares: • Sondas para hibridación o para amplificación en PCR. Análisis filogenético mediante secuenciación de 16S rRNA. Métodos de identificación tradicionales Identificación de enterobacterias: Como ejemplo, diversos géneros y especies de enterobacterias se identificarán mediante: - Aislamiento en medio selectivo (MacConkey) - Tinción de Gram- Sistema de identificación API • • Prueba de la oxidasa: Una varilla de identificación de la actividad oxidasa se pone en contacto con una masa bacteriana de la cepa a ensayar.

Sistema de identificación API. La batería de pruebas API20E es un sistema de identificación rápida para bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram(-). Básicamente consta de 23 tests bioquímicosestandarizados y miniaturizados y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rápido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioquímica distinta. Los microtubos se inoculan con una suspensión de microorganismos, en agua o solución

salina, querehidrata los medios. Las tiras se incuban a 37° C y por efecto del metabolismo bacteriano se van a producir cambios de colores espontáneos o bien al añadir reactivos. La lectura de las reacciones se hace mediante comparación con una tabla de lectura donde se indica si los resultados son positivos o negativos. Instrucciones API.

1.- Se humidifica el sistema mediante adición de agua destilada enlos pocillos de la base de plástico transparente.

2.- Se toma con el asa de siembras una colonia de la cepa a analizar y se resuspende en 5ml de suero fisiológico estéril. Se homogeniza la suspensión.

3.- Con ayuda de una pipeta Pasteur estéril (y chupetín) se rellenan los pocillos del sistema de identificación según las indicaciones. Hasta el borde del tubo en todos los casos excepto: -enlos marcados con el rectángulo abierto [_] en los que se rellena también la cúpula (CIT, VP, GEL). - en el caso de los tubos marcados con subrayado _ (ADH, LDC, ODC, H2S, URE), se realizará anaerobiosis mediante adición de parafina estéril rellenando la cúpula del tubo (una vez lleno el tubo con la muestra). Se incuba a 37º C durante 18-24 h

Se observan los resultados de las pruebas bioquímicasen cada pocillo o microtubo: - Tras observar el resultado de la reacción de fermentación de la glucosa en el tubo GLU (anotar en hoja de resultados), en este mismo tubo se observa la reacción de reducción de nitratos (mediante la adicción de los reactivos NIT-1 y NIT-2 sucesivamente). - Se adicionan los reactivos indicados en los tubos correspondientes (TDA, IND, VOP-1 + VP-2) - Los resultados...