bacterias (tincion de Gram)

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Manual de practicas del laboratorio de

MICROBIOLOG´ GENERAL
IA

Autores:

Diana Mar´ Echeverry Arango
ıa
Olga In´s Montoya Campuzano
e

Universidad Nacional de Colombia
Biolog´ y Zooctenia
ıa
Medell´ Colombia
ın,
2013

´
Indice general
LISTA DE FIGURAS

III

LISTA DE TABLAS

IV

´
4. COLORACION DE GRAM
4.1. Introducci´n . . . . . .
o
4.2. Objetivos . . . . .. .
4.3. Materiales . . . . . . .
4.4. Procedimiento . . . . .
4.5. Cuestionario . . . . . .

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BIBLIOGRAF´
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LISTA DE FIGURAS
4-1. Coloraci´n de Gram . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
o

3

LISTA DE TABLAS
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4-1.REPORTE DE PRACTICA No 3. Coloraci´n de gram . . . . . . . . . . . .
o

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4 COLORACION DE GRAM
4.1.

Introducci´n
o

La coloraci´n de Gram, es una t´cnica diferencial que utiliza dos colorantes b´sicos un moro
e
a
diente y un decolorante, propuesta por el medico Dan´s Christian Gram en 1884; es la m´s
e
a
importante y utilizada en microbiolog´ Se caracteriza por no te˜ir de formahomog´nea a
ıa.
n
e
todas las especies bacterianas; clasificando las bacterias en dos grandes grupos Gram positivas y Gram negativas, seg´n retengan o no el colorante primario usado en la tinci´n.
u
o
Permitiendo agrupar las bacterias en Gram Negativas y Gram Positivas, se diferencian entre
s´ por la composici´n qu´
ı
o
ımica de la pared celular y su permeabilidad. La pared de las Gramnegativas es m´s delgada y presenta un contenido lip´
a
ıdico diez veces mayor que el de las
Gram positivas, lo cual dificulta la tinci´n y la retenci´n del colorante en el citoplasma.
o
o
Algunas bacterias se clasifican como Gram variables, porque simult´neamente presenta coa
loraci´n Gram positiva y Gram negativa, a´n bajo condiciones optimas de cultivo. Sin emo
u
´
bargo, su estructuraposee una pared Gram positiva, aunque la capa de peptidoglicano es
m´s delgada que la mayor´ de las bacterias Gram positivas.
a
ıa
El cristal violeta y la safranina, act´an como colorante primario y secundario respectivamenu
te y requieren de un mordiente llamado Lugol, que fija el cristal violeta a la pared celular
para evitar ser decolorado con el alcohol acetona; donde ambos gruposbacterianos se observan de un azul m´s fuerte. El Alcohol Acetona, act´a como decolorante al eliminar la capa
a
u
externa lip´
ıdica de la pared celular de las Gram Negativas y como esta presenta solo una
monocapa de Peptidoglicano, se generan grandes poros por donde se elimina el cristal violeta; en cambio las Gram Positivas, no se ven afectadas por la acci´n del decolorante, debido
o
a que nopresentan la capa externa lip´
ıdica, pero si varias capas de Peptidoglicano, el cual
se deshidrata formando poros peque˜os evitando la salida del colorante. En consecuencia
n
las Gram Negativas se decoloran y las Gram Positivas retienen el colorante. La safranina,
colorante secundario tendr´ la funci´n de hacer el contraste al te˜ir las bacterias Gram Nea
o
n
gativas decoloradas en el pasoanterior.

´
4 COLORACION DE GRAM

2

4.2.

Objetivos

Clasificar Algunas especies bacterianas, en Gram positivas o en Gram negativas.
Diferenciar las bacterias Gram positivas, de las Gram negativas.
Reconocer los distintos modelos de pared bacteriana.

4.3.

Materiales

Cultivos de bacterias Gram positivas y Gram negativas de 24 horas de in´culados
o
Mecheros de alcohol y...