Bacterias

Pruebas bioquímicas. Las pruebas bioquímicas permiten determinar las características metabólicas de las bacterias objeto de identificación. Algunas de estas pruebas son técnicas rápidas, ya que evalúan la presencia de una enzima preformada y su lectura varía entre unos segundos hasta unas pocas horas. Otras pruebas requieren para su lectura el crecimiento del microorganismo con una incubaciónprevia de 18 a 48h; a este grupo pertenecen la mayoría de las pruebas que detectan componentes metabólicos o aquellas que determinan la sensibilidad de un microorganismo a una sustancia dada tras cultivo en medios de identificación que contienen el sustrato a metabolizar.
2.4.4.1. Pruebas que se utilizan en la identificación preliminar, con lectura inmediata:
2.4.4.1.1. Catalasa. La catalasa esun enzima presente en la mayoría de los microorganismos que poseen citocromos. Las bacterias que sintetizan catalasa hidrolizan el peróxido de hidrógeno en agua y oxigeno gaseoso que se libera en forma de burbujas. El principal objetivo de esta prueba es separar Micrococacceae (positiva) de Streptococcus spp. y Enterococcus spp. (negativa).
2.4.4.1.2. Oxidasa. Esta prueba sirve para determinar lapresencia de enzimas oxidasas. La reacción de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidación del citocromo el cual es reducido por el oxígeno molecular produciéndose agua o peróxido de hidrógeno según la especie bacteriana. El oxígeno actúa por tanto como aceptor final de electrones en la cadena transportadora de electrones. Por lo general, el sistemacitocromooxidasa sólo se encuentra en las bacterias aerobias, algunas anaerobias facultativas y, excepcionalmente, en alguna microaerófila (Vibrio fetus), pero las bacterias anaerobias estrictas carecen de actividad oxidasa. Asimismo, la presencia de oxidasa va ligada a la producción de catalasa, ya que ésta degrada el peróxido de hidrógeno que se produce como consecuencia de la reducción del oxígenoy cuya acumulación es tóxica.
2.4.4.2. Pruebas rápidas, con lectura en menos de 6h:
2.4.4.2.1. Hidrólisis del hipurato. Demuestra la capacidad de algunas bacterias para hidrolizar el hipurato de sodio a ácido benzoico y glicina por la acción de la enzima hipuricasa. Como indicador de la reacción se utiliza ninhidrina. Esta prueba se utiliza en la identificación de Campylobacter jejuni,Listeria monocytogenes, Gardnerella vaginalis y Streptococcus agalactiae.
2.4.4.2.2. ß-galactosidasa (ONPG). Esta prueba demuestra la presencia de la enzima ß-galactosidasa. Hay bacterias que a pesar de poseer enzimas que hidrolizan la lactosa (ß-galactosidasas), no pueden actuar sobre ella porque les faltan las enzimas extracelulares apropiadas (permeasas). Para conocer si un microorganismo esproductor de ß-galactosidasa, basta añadir el compuesto orgánico O-nitrofenil- ß-D-galactopiranósido (ONPG) que es incoloro. Si la bacteria posee las enzimas hidrolizantes (ß-galactosidasa), el compuesto se transforma en ortonitrofenol, un derivado cromogénico de color amarillo. Todas las bacterias fermentadoras lentas de la lactosa son ß-galactosidasa positivas.
2.4.4.2.3. Aminopeptidasa: PYR. LaL-pirrolidonil-ß-naftilamida sirve como sustrato para la detección de pirrolidonil peptidasa. Se utiliza principalmente en la identificación de Streptococcus pyogenes y Enterococcus spp. También en la diferenciación de Staphylococcus lugdunensis de otros estafilocos coagulasa negativa.
2.4.4.2.4. LAP. Se utiliza para la detección de la enzima leucina aminopeptidasa (LAP) y es una de las pruebaspara la identificación de cocos grampositivos catalasa negativa; diferencia específicamente los géneros Aerococcus y Leuconostoc de Streptococcus, Enterococcus, Lactococcus, y Pediococcus.
2.4.4.2.5. Ureasa. Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos moléculas de amoniaco por acción del enzima ureasa. Esta actividad enzimática es característica de todas las especies...