Bacterias

Transformación de Bacterias

La transformación envuelve la adquisición de ADN exterior a la bacteria y la competencia genética es la habilidad de poder ir bajo este proceso de transformación. En este experimento hicimos la transformación de una bacteria con plásmidos de un gen resistente a la ampicilina y lacZ. Primero comenzamos desinfectado el área y los materiales con técnicas de asepsia.Luego, utilizamos varias maneras para aumentar la competencia de las bacterias como los “heat shocks” y los cambio de temperatura y exponerlo a una solución fría de cloruro de calcio. Por ultimo, se inocularon las bacterias y al otro día volvimos al laboratorio a ver los resultados. Esperábamos que las bacterias crecieran en colonias azules por la reacción que están tendrían con el medio en dondese inocularon que contenía lactosa y X-gal lo que reacciona con la enzima que se crean al transformar las bacterias con lacZ en presencia de IPTG. Como resultado, no obtuvimos colonias azules pero existen varias fuentes de errores por las cuales la transformación no se pudo dar o si se dio el indicador IPTG no funcionó correctamente.
Introducción:
La transformación de bacterias fue presentadapor el bacteriólogo Frederick Griffith. Griffith descubrió que una cepa de bacterias no-virulenta de Estreptococos pneumoniae podía ser transformada en virulenta al exponerla a cepas virulentas que habían sido matadas con calor. En 1944, Oswald Avery, Colin McLeod y Maclyn McCarty demostraron la transferencia génica en S. pneumoniae. Ellos llegaron a la conclusión y demostraron que la estructuraquímica del principio de transformación es el DNA excluyendo las proteínas u otras macromoléculas (3).
Las bacterias pueden obtener nuevo material genético por tres maneras: transducción, conjugación y transformación. La transformación envuelve la adquisición de DNA del ambiente extra celular y la competencia genética es la habilidad de poder ir bajo este proceso de transformación (1). El ADN extracelular se encuentra en el ambiente y se introduce a través de la membrana de la célula bacteriana. La transformación bacteriana, en la que las células toman hilos sueltos de DNA es la manera más simple de intercambio genético (4). La transformación ocurre de forma natural en algunas especies de bacterias, aunque también se puede efectuar por medios artificiales. Para que ocurra la transformación,la bacteria debe estar en un estado de competencia. Existen diversos factores que afectan la eficiencia en que el DNA puede ser transformado y recombinado (2). En este experimento utilizamos varios métodos para aumentar la eficiencia como los “heat shocks”, los cambios de temperatura y algunas sustancias.
La pregunta en este experimento es que: ¿Si hacemos las bacterias competetes e inducimosgenes de resistencia al antibiotic ampicilina y lacZ, estas se transformaran?. Nuestra hipótesis fue que si aumentábamos la competencia de las bacterias por diversos medios, cuando la pongamos en un plásmido ocurrirá una transformación bacteriana. Para ésto utilizamos un plásmido pUC19 que contenía un gen para la resistencia de ampicilina y el gen lacZ. Cuando estos reaccionen en presencia de uninducidor (IPTG) las bacterias transformadas adquiriran un color azul por la formación de la enzima B-galactosidosa producida por el gen lacZ que degradara el X-gal y la lactosa contenida en el medio de inoculación.

Metodología:
Para comenzar con el proceso de transformación de bacterias, se limpió, recogió y desinfectó el área de trabajo. Después de haber limpiado y desinfectado la mesa secomenzó el proceso de la transformación de bacterias. Primero rotulamos los tubos de ensayo y luego se añadió 1.5 ml del cultivo de bacterias a los tubos BC y CL, siendo CL el grupo control. Luego, se centrifugó durante 60 segundos y se descartó el sobrante. Se colocaron los tubos en el hielo mientras le añadimos 200 ul de TS a cada tubo y se mezcló con la punta de la micro-pipeta y se incubó...