Bacteriofagos
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
LABORATORIO DE GENÉTICA MICROBIANA
Profesores:
García Rangel María Virgen
José Antonio Ibarra García
Objetivos
Conocer algunos aspectos de la metodología empleada en el trabajo con bacteriófagos.
Establecer algunas de las propiedades de las partículas fágicas que permiten su identificación.
Aislar bacteriófagos demuestras de aguas negras.
Determinar el título y ciclo de multiplicación de los fagos presentes en la muestras de agua, con base en su morfología de placa.
Introducción
Los bacteriófagos (fagos) son virus que infectan bacterias, la mayoría contienen genomas con DNA bicatenario y son los más comunes en la naturaleza, empero, también se conocen virus con genoma de RNA de cadena sencilla, de doblecadena segmentados y DNA de cadena sencilla.
Generalmente tienen envolturas lipídicas, pero pueden carecer de ellas.
Se clasifican de forma general de acuerdo al ciclo de vida que presentan en virulentos y temperados.
En la práctica se trabajó con el virus T4, λ y M13.
El virus T4 pertenece a los virulentos, cuya característica es la lisis de la célula hospedera, su cabeza es icosaédrica y estáunida a una cola, a la cual se le añade un cuello que se conecta con una placa basal donde se fijan unas fibras, su DNA es bicatenario lineal y codifica para más de 250 proteínas.
El ciclo consiste en: Reconocimiento, adsorción, inyección, transcripción del DNA, Replicación, ensamblaje y liberación, para la última fase el fago codifica una enzima lítica (lisozima) que ataca el peptidoglicana de lacélula hospedera. Un ciclo lítico dura 25 minutos aproximadamente y se liberan más de 100 nuevas partículas víricas, al destriur completamente a la célula hospedera.
El bacteriófago lambda es un virus temperado, lo que implica que su ciclo de vida es lisogénico, en el cual la mayor parte de los genes víricos no se expresan y el genoma viral se replica en sincronía con el cromosoma celular, sinembargo puede también llevar a cabo el ciclo lítico, esto depende de la expresión de algunos genes. Es capaz de infectar a Escherichia coli.
Su DNA es lineal y bicatenario, contiene 50000 pares de bases.
Las fases son: Reconocimiento, adsorción, inyección, integración de DNA vírico al DNA hospedador (profago), división celular normal.
El virus M13 también infecta a E. coli, reconoce la pilina queconstituye al pili sexual, pertenece a los fagos temperados, su DNa es bicatenario y no se inserta en el DNA hospedador. Conforme se va ensamblando el virus va saliendo de la célula.
Resultados
Prueba de la gota del filtrado de aguas negras.
0.1mL de cada cepa indicadora fue mezclada con 3mL de agar blando fundid por separado y se vertieron sobre placas que contenían agar Luria (L), una vezsolidificados se agregó sobre cada placa una gota del filtrado de aguas negras y se incubó a 37°C por 24 horas.
Tabla 1. Determinación cualitativa de bacteriófagos obtenidos de muestras de aguas negras de distintas procedencias.
Equipo
Lugar de procedencia de la muestra
Cepas indicadoras
Escherichia coli
W3110
Escherichia coli
TG1
Escherichia coli
B837
Klebsiella pneumoniae
Staphylococcus aureusBacillus subtilis 5819
Salmonella typhimurium
1
Río San Javier Tlalnepantla
+
Turbia Homogénea
T:2mm
+
Puntiforme
Clara
B: Definido
T 1mm
+
Clara
B: Definido
T: 1mm
+
Turbia homogénea
T: 3mm
-
-
-
2
Canal de Unidad Habitacional Cuatro Vientos Edo. Mex
+
Centro claro periferia turbia
T:13 mm
Clara homogénea
T:2mm
+
Centro claro periferia turbia
-
+
Turbia homogénea
T:2mm
-
-
-
3
Canal de Teloyucan
+Claras
B: Definido
T:2mm
Placas turbias homogéneas
T:1mm
+
Claras
B:Definido
T:2mm
-
+
Centro claro periferia turbia
B:Definido
T: 5mm
Puntiforme
+
Turbia homogenea
B: Definido
T: <1mm
-
-
4
Canal Av. Central Col. Rustica Xalostoc Edo. Méx
+
Turbia homogénea
B:Definido
T: 7 mm
Turbia homogénea
B:Definido
T: 2 mm
+
Turbia homogénea
B: No definido
T: 2mm
+
Turbia homogénea
B: Definido
T:1mm
+...
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