Bacteriologa
Páginas: 9 (2049 palabras)
Publicado: 5 de abril de 2013
M
ANUAL
DE
P
ROCEDIMIENTOS
DE
L
ABORATORIO
EN
T
ÉCNICAS
B
ÁSICAS
DE
H
EMATOLOGÍA
26
I
NSTITUTO
N
ACIONAL
DE
S
ALUD
MPR-CNSP-019
frotis sanguíneo puede variar según sea el ángulo que formen entresí ambos portaobjetos. Así, si es superior a 45º, la extensión obtenidaserá gruesa y corta, si es inferior a 45º será larga y fina. El secado delfrotis es atemperatura ambiente y en posición horizontal.
Fig. 12
Zona excesivamente gruesa:
Se halla en la región inmediata al punto departida de la extensión (cabeza). En ella se aprecia siempre un aumento delinfocitos.
Zona excesivamente fina:
Corresponde al final de la extensión y termina enun área donde las células adoptan una posición acartonada (barbas). Enesta región existe un excesode granulocitos y monocitos.
Zona ideal:
Corresponde a la región intermedia del frotis y en ella existe unreparto equilibrado de células.
5.2 COLORACIONES USADAS
Una vez seco el frotis, se procede a la tinción hematológica con el colorante deRomanowsky, constituido por la mezcla de eosina y azul de metileno. Dentrode éstas tenemos:
5.2.1
Colorante de Giemsa.
5.2.2
Colorante deMay-Grunwald.
5.2.3
Colorante de Wright.
5.2.4
Colorante de Leishman.
Fig. 12
EXTENDIDO DE SANGRE
manual de TEC. BASICAS HEMATOLOGIA.pmd10/05/2005, 14:1226
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NSTITUTO
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MPR-CNSP-019
Preparación de colorantes (Anexo A)
Para el estudio de lascélulas sanguíneas utilizar el colorante 5.2.3 y 5.2.4.
Para el estudio de hemoparásitos utilizar el colorante 5.2.1.
Utilizar el colorante 5.2.2 para casos especiales en que se desee observarcon mayor claridad y especificidad los gránulos de los neutrofilos.
5.3 TINCIÓN CON COLORANTE DE WRIGHT5.3.1 Fundamento
El colorante de Wright va a permitir suministrar un medio para estudiar lasangrey determinar las variaciones y anormalidades de estructura, forma ytamaño de los eritrocitos, su contenido de hemoglobina y sus propiedades decoloración. La información obtenida de un frotis de sangre periférica dependeen gran parte de la calidad del extendido y la coloración.
5.3.2Materiales5.3.2.1
Colorante de Wright (Anexo A).
5.3.2.2
Frasco gotero.
5.3.2.3
Solución amortiguada tamponada(Anexo A).
5.3.3Procedimiento5.3.3.1
Una vez obtenido el frotis sanguíneo, se le dejará secar entre 15 y 20minutos.
5.3.3.2
Luego se coloca la preparación en un soporte y se cubre con el colo-rante de Wright, dejándolo por espacio de 5 minutos.
5.3.3.3
Posteriormente se añade solución amortiguada tamponada en partesiguales hasta obtener un brillo metálico, dejando 6 minutos adicionales.5.3.3.4
Finalmente se lava con agua corriente y se deja secar.
5.3.3.5
Se coloca en el microscopio y, con pequeño aumento, se revisa lacalidad de la coloración, la cantidad aproximada de glóbulos blancosy se escoge el sitio para iniciar el recuento. Se coloca una gota deaceite de inmersión y se enfoca a un aumento de 100xLa forma de los glóbulos rojos se examinará detenidamente obser-vandoademás del color (cantidad de hemoglobina), presencia deplaquetas, su agrupación y distribución.
manual de TEC. BASICAS HEMATOLOGIA.pmd10/05/2005, 14:1227
5.3.3.6
Posteriormente, se hace el recuento diferencial de glóbulos blancosen 100 células, para lo cual se deberá conocer las diferencias entreneutrófilos, eosinófilos, linfocitos y monocitos.Una extensión de sangre bien teñida debecaracterizarse por unabuena diferenciación de las estructuras subcelulares en los leucocitos,una coloración rosada de los hematíes y la ausencia de precipitados.Los defectos más frecuentes observados en la tinción del frotis san-guíneo son:Coloración excesivamente azul, debido a:
Frotis excesivamente grueso.
Lavado insuficiente.
Tinción muy prolongada.
Empleo de colorante excesivamente...
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frotis sanguíneo puede variar según sea el ángulo que formen entresí ambos portaobjetos. Así, si es superior a 45º, la extensión obtenidaserá gruesa y corta, si es inferior a 45º será larga y fina. El secado delfrotis es atemperatura ambiente y en posición horizontal.
Fig. 12
Zona excesivamente gruesa:
Se halla en la región inmediata al punto departida de la extensión (cabeza). En ella se aprecia siempre un aumento delinfocitos.
Zona excesivamente fina:
Corresponde al final de la extensión y termina enun área donde las células adoptan una posición acartonada (barbas). Enesta región existe un excesode granulocitos y monocitos.
Zona ideal:
Corresponde a la región intermedia del frotis y en ella existe unreparto equilibrado de células.
5.2 COLORACIONES USADAS
Una vez seco el frotis, se procede a la tinción hematológica con el colorante deRomanowsky, constituido por la mezcla de eosina y azul de metileno. Dentrode éstas tenemos:
5.2.1
Colorante de Giemsa.
5.2.2
Colorante deMay-Grunwald.
5.2.3
Colorante de Wright.
5.2.4
Colorante de Leishman.
Fig. 12
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Preparación de colorantes (Anexo A)
Para el estudio de lascélulas sanguíneas utilizar el colorante 5.2.3 y 5.2.4.
Para el estudio de hemoparásitos utilizar el colorante 5.2.1.
Utilizar el colorante 5.2.2 para casos especiales en que se desee observarcon mayor claridad y especificidad los gránulos de los neutrofilos.
5.3 TINCIÓN CON COLORANTE DE WRIGHT5.3.1 Fundamento
El colorante de Wright va a permitir suministrar un medio para estudiar lasangrey determinar las variaciones y anormalidades de estructura, forma ytamaño de los eritrocitos, su contenido de hemoglobina y sus propiedades decoloración. La información obtenida de un frotis de sangre periférica dependeen gran parte de la calidad del extendido y la coloración.
5.3.2Materiales5.3.2.1
Colorante de Wright (Anexo A).
5.3.2.2
Frasco gotero.
5.3.2.3
Solución amortiguada tamponada(Anexo A).
5.3.3Procedimiento5.3.3.1
Una vez obtenido el frotis sanguíneo, se le dejará secar entre 15 y 20minutos.
5.3.3.2
Luego se coloca la preparación en un soporte y se cubre con el colo-rante de Wright, dejándolo por espacio de 5 minutos.
5.3.3.3
Posteriormente se añade solución amortiguada tamponada en partesiguales hasta obtener un brillo metálico, dejando 6 minutos adicionales.5.3.3.4
Finalmente se lava con agua corriente y se deja secar.
5.3.3.5
Se coloca en el microscopio y, con pequeño aumento, se revisa lacalidad de la coloración, la cantidad aproximada de glóbulos blancosy se escoge el sitio para iniciar el recuento. Se coloca una gota deaceite de inmersión y se enfoca a un aumento de 100xLa forma de los glóbulos rojos se examinará detenidamente obser-vandoademás del color (cantidad de hemoglobina), presencia deplaquetas, su agrupación y distribución.
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5.3.3.6
Posteriormente, se hace el recuento diferencial de glóbulos blancosen 100 células, para lo cual se deberá conocer las diferencias entreneutrófilos, eosinófilos, linfocitos y monocitos.Una extensión de sangre bien teñida debecaracterizarse por unabuena diferenciación de las estructuras subcelulares en los leucocitos,una coloración rosada de los hematíes y la ausencia de precipitados.Los defectos más frecuentes observados en la tinción del frotis san-guíneo son:Coloración excesivamente azul, debido a:
Frotis excesivamente grueso.
Lavado insuficiente.
Tinción muy prolongada.
Empleo de colorante excesivamente...
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