Bacteriologa

1. Describa y fundamente algunos de los métodos comunes de extracción de ADN (salting out, fenol –cloroformo, cromatograficos, ebullición o Boiling, etc).

METODO DE SALTING OUT: Este proceso se hace después de haber realizado la lisis de glóbulos rojos. Como su nombre lo dice “sales afuera” Refiere a que en este método se agrega un buffer que contiene acetato de amonio la cual es una sal.Esto hace que se precipiten las proteínas de la sangre ya que son menos solubles en altas concentraciones de sal, provocando lisis y obtención de los ácidos nucleicos.

FENOL CLOROFORMO: Es una técnica Orgánica. El fenol es un alcohol, tiene la capacidad de romper la pared celular, membrana plasmática y nuclear de los leucocitos. Y a su vez el cloroformo es utilizado para precipitar el ADNCROMATOGRAFICOS (SILICA-GEL): es un método de purificación de los ácidos nucleicos. En esta técnica se aprovecha las partículas porosas de la gel la cual actuara como una especie de tamizaje de moléculas de diferentes características. Quedando las partículas más grandes en la parte superior hasta llegar a las moléculas más pequeñas que pasan por difusión. Las moléculas más pequeñas quedan atrapadasen el gel.

Se utilizan cuatro tipos de gel que pueden ser:

1. DEXTRAN POLIACRILAMIDA
2. AGAROSA
3. POLIACRLAMIDA – DEXTRAN

METODO DE EBULLICION O BOILING:

2. Para que se utilizan los siguientes reactivos y cuál es su acción física, química o bioquímica en las células durante el proceso de extracción de ADN?
PROTEINASA K: Es una enzima, que hace procesos de rompimiento demembranas celulares ayudando así a la degradación de proteínas, durante el procedimiento de extracción del ADN
LISOZIMA: Es la enzima encargada de romper suavemente la pared celular, desestabilizándola. Su punto diana son las uniones glucocidicas entre los polisacáridos.
SDS: (Dodecil sulfato de sodio) Es un detergente que vuelve soluble a las proteínas, para así dar paso a reactivos que logrendesestabilizar estas proteínas.
TRIS HCL: Es en el encargado de proteger al ADN durante el procedimiento de extracción, del pH; ya que este es vulnerable a estos cambios.
EDTA: (Ácido etilen diamino tetra acético) Tiene como función proteger el ADN de la enzima nucleasa impidiendo que esta se una y rompa los ácidos nucleicos. Aparte solubiliza los lípidos de las membranas de las proteínas.
NACL: Aligual que el SDS Es un detergente y por lo tanto se utiliza en la extracción de ADN con el objetivo de romper las paredes y membranas de las células de las que se quiere deshacer para extraer el ADN.
FENOL CLOROFORMO: El papel del fenol en este caso también sería para ayudar a romper la pared celular y las membranas plasmáticas y nucleares de las proteínas que restan para así poder liberar el ADN,mientras que el cloroformo precipita el ADN
ALCOHOL ISOAMILICO: protege la molécula de ADN previniendo que esta se rompa, estabilizándola y también la precipita.
ISOPROPANOL: Tiene como función volver insoluble el ADN después de haber sido extraído totalmente y así poder ser analizado.
ETANOL ABSOLUTO: Es utilizado para precipitar la solución del ADN
ETANOL 70% : Este tipo de etanol tiene lamisma utilidad que los anteriores nombrados solo que es más adecuado para extracción de ADN de vegetales y alimentos derivados de vegetales, está indicado para eliminar polisacáridos.
CTAB: ( Bromuro de cetil-trimetil amonio) Utilizado para usar en procesos de extracción de ADN en vegetales y frutos derivados de vegetales. Se caracteriza por ser un tamponante del ADN se adhiere fuertemente a él,desplaza las proteínas y previene la degradación.
CLORURO DE AMONIO: Es una sal igualmente utilizada para rompimiento de proteínas para liberar el ADN
BICARBONATO DE POTASIO: Lisa las células eritrocitarias.
ACETATO DE AMONIO: Es otra de las sales más utilizadas para el proceso de extracción de ADN.
TE: (Tris, tampón de pH común y EDTA) Su función es proteger el ADN para que no se rompa,...