Bacteriologia

jUNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEl CUSCO
CARRERA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
LABORATORIO DE ANÁLIS BIOQUÍMICO CLÍNICO
PRACTICA N° 6

BACTERIOLOGÍA
I. OBJETIVOS:
- Conocer las bacterias comúnmente causantes de infección urinaria, infección intestinal e infección de las vías respiratorias superiores.
- Conocer igualmente las bacterias más comunescausantes de infección intestinal, y urinaria detectables en un urocultivo y ver su sensibilidad en el antibiograma correspondiente.
- Lograr la capacidad de poder realizar cultivos bacteriológicos de diferentes
materiales biológicos.
- Adiestrar al alumno para la preparación de medios de cultivos desde los simples hasta los complejos.
- Lograr la habilidad en los alumnospara la siembra correcta, aislamiento, traslado y diferenciación de las bacterias en diferentes medios de cultivo
II. GENERALIDADES:
Un examen bacteriológico de las muestras comprende dos tipos generales de procedimientos:
1. Examen microscópico directo con coloración o sin ella que nos orienta del agente etiológico presente.
2 Realización de cultivos en mediosadecuados para la correcta identificación del agente.
MÉTODOS DE COLORACIÓN.
Hay varios métodos de tinción para exámenes bacteriológicos el más frecuente es el Gran, con alguna de sus muchas modificaciones como la de Burke.
2.1-- COLORACIÓN DE GRAM.- Esta tinción clasifica las bacterias en Gran Positivas y Gram negativas, los componentes de la pared celular tienen afinidad porlos componentes ácido-básicos utilizados en la tinción. El fundamento de esta coloración se debe a que las bacterias Gram. positivas se colorean de azul por que se forma un complejo carbohidrato —proteína—ribonucleato de magnesio entre el cristal violeta y el lugol, además no se decoloran por acción del alcohol acetona.
Las bacterias Gram. negativas presentan un color rojo porquese decoloran por acción del alcohol acetona y toman la coloración del colorante de contraste (safranina).
REACTIVOS DE LA COLORACIÓN DEL GRAM
l. Cristal violeta alcalino. Solución A: Cristal violeta o violeta de genciana 1. g. Y agua destilada csp 100 ml. Solución B: Bicarbonato de sodio 5 g. y agua destilada osp 100 ml. se debe añadir merthiolate (1: 20,000).2. SOLUCIÓN DE YODO: Yodo 1 g. y yoduro de potasio 2 g. agua destilada 200 ml.
3. SOLUCIÓN DE COLORANTE: Éter 1 Vol. Y acetona 3 Vol.
4. COLORACIÓN DE CONTRASTE: Safranina 0.5 g. agua destilada csp 100 ml.
TÉCNICA:
Una vez fijado el extendido por el calor, se cubre el preparado con la solución A y se añade 3 a 5 gotas de la solución Bsobre el colorante que debe actuar un minuto. Se lava bien con agua, se cubre con la solución de yodo y se deja actuar durante un minuto. Se lava con agua e inmediatamente se decolora con éter acetona, añadiendo gota a gota hasta que la solución sea incolora, se lava con agua y se escurre. Se cubre el extendido con la solución de safranina por 15 a 20 segundos, se lava con agua, se deja secar yse examina. Las bacterias Gram positivas aparecen de cloro azul o violeta y las Gram negativas de color rojo.
MEDIOS DE CULTIVO.
Son sustancias nutritivas que se dan a los microorganismos para su desarrollo IN VITRO. Sus componentes deben satisfacer sus necesidades en condiciones físico—químicas convenientes.
Para el aislamiento de bacterias de un material a estudiar esnecesario el cultivo de estas por medios bacteriológicos que les permitan llevar acabo sus actividades vitales por lo que es, necesario la utilización de los medios de cultivo como substratos fácilmente asimilables, con una determinada concentración de iones de hidrógeno, sales, compuestos nitrogenados, hidratos de carbono, vitaminas, pH y temperatura adecuada.

CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DA...