Bacteriologo

TALLER DE GENETICA
1)
El DNA genómico es el DNA cromosómico que ha sido cortado en fragmentos de restricción por enzimas de restricción y luego clonado. El cDNA, o DNA complementario es el DNA transcripto del RNA por la enzima transcriptasa inversa y luego clonado; a diferencia del DNA genómico no contiene intrones.
Las enzimas de restricción protegen a las bacterias del DNA extraño quehaya podido ingresar, incluso del de otras cepas bacterianas. Escinden el DNA sólo en secuencias de nucleótidos muy específicas, cuya longitud varía entre cuatro y ocho pares de bases. Estas secuencias se conocen como secuencias de reconocimiento, dado que son “reconocidas” por enzimas de restricción específicas. Las bacterias protegen a su DNA de sus propias enzimas de restricción añadiendo ungrupo metilo (CH3) a uno o más de los nucleótidos de las secuencias de reconocimiento de su DNA. Esta metilación, que ocurre durante la replicación del DNA, es llevada a cabo por enzimas especiales, las enzimas metiladoras.

Los retrovirus son un tipo de virus animal que contiene RNA como material genético. Las células eucarióticas son hospedadoras de virus que contienen DNA o RNA como materialgenético. En algunos virus que contienen RNA, el RNA genómico actúa primero como molde para sintetizar una cadena complementaria de DNA. Esta síntesis es catalizada por una DNA polimerasa viral dependiente de RNA, conocida como transcriptasa inversa. Esta enzima también es la encargada de sintetizar la segunda cadena de DNA –que representa la secuencia del RNA molde original– y es complementaria, porlo tanto, a la primer cadena de DNA sintetizada. La molécula de DNA de doble cadena resultante se inserta en el genoma de la célula hospedadora. A partir de este DNA integrado se transcriben, subsiguientemente, tanto el nuevo RNA genómico viral como el mRNA para la síntesis de proteínas virales.

2)Las técnicas más importantes son:
a) Métodos de obtención de fragmentos específicos de DNA quepermiten su análisis, y el aislamiento y manipulación de genes individuales. La obtención de fragmentos específicos puede ser realizado con enzimas de restricción, produciendo DNA genómico, con la transcriptasa inversa, produciendo cDNA o a través de síntesis de oligonucleótidos en el laboratorio. Los fragmentos de DNA pueden ser separados, de acuerdo a su tamaño, por medio de la técnica deelectroforesis en gel.
b) Métodos de obtención de múltiples copias de fragmentos idénticos de DNA, como la clonación y la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). La clonación se realiza por medio de transportadores (vectores) por medio de los cuales el fragmento de DNA de interés puede ser incorporado al interior de las células bacterianas. A medida que la célula y los vectores se replican, se obtienenmúltiples copias del fragmento. Otro método que permite, a partir de una muestra muy pequeña de DNA, obtener millones de copias de DNA in vitro, en unas pocas horas y sin necesidad de usar células vivas es la llamada reacción en cadena de la polimerasa (PCR). El método se basa en la repetición cíclica de tres reacciones sucesivas. Al cabo del primer ciclo de tres reacciones, el fragmento de DNAelegido se ha duplicado y, por lo tanto, se ha duplicado la cantidad de DNA molde disponible para el segundo ciclo; lo mismo ocurre transcurrido cada ciclo de replicación.
c) Localización e identificación de fragmentos específicos de DNA, o de RNA, por hibridación de ácidos nucleicos, método que también permite estimar similitudes entre ácidos nucleicos de orígenes diferentes. Esta técnicaaprovecha las propiedades de apareamiento de las bases de los ácidos nucleicos. Si se somete al DNA a alta temperatura o a un pH muy alto, los puentes de hidrógeno que mantienen unidas a las dos cadenas se rompen. Cuando se enfría lentamente la solución, los puentes de hidrógeno vuelven a formarse, reconstituyendo la doble hélice. Cuando se mezclan DNA desnaturalizados de fuentes diferentes, las...