Balance de fermentación

Práctica No. 2 Balance de Fermentación.
Objetivos:
* Mediante el método del DNS calcular la cantidad de glucosa, formada en la fermentación realizada por Saccharomyces cerevisiae.
* Realizar el balance de fermentación con los datos obtenidos.
* Determinar la cantidad de etanol producido mediante el método de microdifusión de Conway.
* Determinar la cantidad de CO2 porgravimetría.
Hipótesis:
* SI las levaduras llevan a cabo una fermentación alcoholica se producirá CO2 y Etanol
*
Diseño experimental:
Método de DNS
Se utilizó el método del ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS), ya que se basa en la reducción del DNS (de color amarillo) por la glucosa u otro azúcar reductor al ácido 3-amino-5-nitrosalicílico (de color rojo ladrillo), cuya presencia puede detectarsepor lectura de la absorbancia en la zona de 540-570 nm. Este método se empleó porque es más rápido y fácil que el método de la antrona, en el que se emplea ácido sulfúrico concentrado así como debe de haber agitación vigorosa, seguida de una estratificación lenta al agregar la antrona fría.

Método de Conway
3 CH3CH2OH + 2 K2Cr2O7 + 8 H2SO4 → 3 CH3COOH + 2 Cr2(SO4)3 + 2 K2SO4 + 11 H2O
En estareacción el etanol se oxida para convertirse en ácido acético y el cromo (VI) en ion dicromato, de color amarillo anaranjado, se reduce a ion cromo (III), de color verde.
La microdifusión se realiza en cámaras de Conway que poseen en el compartimiento externo muestra un agente liberador (K2C03) y en el interno el agente atrapante K2Cr207. En este caso, se produce la captación y oxidación deletanol hacia ácido acético, forzándose la remoción completa del primer compuesto al cabo de un tiempo. Esta prueba no es específica ya que interfieren otros alcoholes y aldehídos. Es un método espectrofotométrico, indirecto y de oxido reducción. [5 y 6]
Determinación de CO2 por gravimetría.
El CO2 atrapado durante la fermentación con el NaOH, forma Bicarbonato de sodio, el cual al ponerse encontacto con el BaCl2 forma un precipitado blanco el cual es filtrado y cuantificado y por una diferencia de pesos y multiplicando por el factor gravimétrico nos da la cantidad de CO2 formado durante la fermentación.
2NaOH + 2CO2 →Na2CO3 + OH-
Na2CO3 + BaCl2 → BaCO3 + 2NaCl
Registro de datos:
Tabla 1. Datos para la elaboración de la curva tipo de etanol por el método de Conway.
µg de Etanol |Absorbencia a 445 nm |
0 | 1.284 |
500 | 1.103 |
1000 | 0.921 |
1500 | 0.774 |
2000 | 0.664 |
2500 | 0.484 |

Tabla 2. Determinación de etanol formado en la fermentación mediante el método de Conway.
Muestras | Absorbencia a 445nm |
0.2 ml de muestra fermentada | 0.966 |
0.5 ml de muestra fermentada | 0.651 |
1 ml de muestra testigo | 1.194 |

Tabla 3. Datos para la elaboraciónde la curva tipo de glucosa por el método de DNS.
µg de glucosa | Absorbencia a 450 nm |
100 | 0.166 |
200 | 0.378 |
300 | 0.601 |
400 | 0.832 |
500 | 1.049 |

Tabla 4. Determinación de glucosa Residual de la fermentación por el método de DNS.
Muestra | Absorbencia a 450 nm |
0.2 ml de sobrenadante diluido 1: | 0.199 |
0.4 ml de sobrenadante diluido 1: | 0.413 |
1 ml desobrenadante testigo diluido 1: | 0.012 |

Tabla 5. Determinación de CO2 por gravimetría.
Muestras | Peso en gramos (gr) |
Papel filtro | 0.8101 |
Papel filtro + BaCO3 | 0.9290 |
BaCO3 de fermentación | 0.1189 |
Papel filtro testigo | 0.8152 |
Papel filtro + BaCO3 testigo | 0.8520 |
BaCO3 testigo | 0.0368 |

Manejo de datos:
Determinación de glucosa por el método del ácido 3,5-dinitrosalicilico
Ecuación de la pendiente: y= 2.13*10-3 x - 0.0289
1 mL testigo Abs (540 nm) 0.012= x= 0.012+0.02890.00213=19.20 µgmLglucosa
Se repite para las dos lecturas del problema
Para obtener los mg de glucosa residual, ejemplo testigo:
mg Glc residual= (µg interpolados * 1/alícuota * 10 * 20) / 1000
Tomar en cuenta que le problema se aforo a...